Plizyè envansyon revolisyonè nan istwa teknoloji deteksyon nan tèt mwen se teknoloji imunolabeling ki baze sou prensip lyezon espesifik antijèn-antikò, teknoloji PCR ak teknoloji sekans.Jodi a nou pral pale sou teknoloji PCR.Dapre evolisyon teknoloji PCR, moun yo abitye divize teknoloji PCR an twa jenerasyon: teknoloji PCR òdinè, teknoloji PCR fluoresan an tan reyèl ak teknoloji PCR dijital.
Cteknik PCR komen
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
Kary Mullis te envante reyaksyon chèn polymerase (reyaksyon chèn polymerase, PCR) an 1983. Yo di ke lè li te kondwi mennaj li, li toudenkou te gen yon flash nan enspirasyon ak te panse nan prensip la nan PCR (sou benefis ki genyen nan kondwi).Kary Mullis te bay Pri Nobèl nan Chimi an 1993. New York Times te fè kòmantè: "Trè orijinal ak enpòtan, prèske divize byoloji nan epòk pre-PCR ak apre-PCR.
Prensip PCR: Anba kataliz ADN polymerase, yo itilize ADN manman an kòm modèl, epi yo itilize Jadendanfan espesifik la kòm pwen depa ekstansyon, epi ADN pitit fi a konplemantè ak ADN modèl manman an kopye an vitro atravè denaturasyon, rkwir, ekstansyon ak lòt etap.Li se yon teknoloji anplifikasyon sentèz ADN an vitro, ki ka rapidman epi espesyalman anplifye nenpòt ADN sib nan vitro.
Avantaj PCR òdinè
1.Metòd klasik, konplè estanda entènasyonal ak domestik
2.Pi ba pri nan reyaktif enstriman
3.Pwodwi PCR yo ka refè pou lòt eksperyans byoloji molekilè
Rekòmande Foregene PCR machin: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Pwodwi ki gen rapò: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Dezavantaj PCR òdinè
1.fasil pou polye
2.operasyon ankonbran
3.sèlman analiz kalitatif
4.Modere sansiblite
5.Gen anplifikasyon ki pa espesifik, epi lè gwoup ki pa espesifik la se menm gwosè ak gwoup sib la, li pa ka distenge.
CPCR ki baze sou elektwoforèz apilè
An repons a enpèfeksyon yo nan PCR òdinè, kèk manifaktirè yo te prezante enstriman mizik ki baze sou prensip elektwoforèz kapilè.Etap elektwoforèz la apre anplifikasyon PCR fini nan kapilè a.Sansiblite a pi wo, epi diferans plizyè baz yo ka distenge epi MAERKER ka kalkile anplifikasyon an.kontni pwodwi.Dezavantaj la se ke pwodwi PCR la toujou bezwen louvri epi mete nan enstriman an, epi toujou gen yon gwo risk pou kontaminasyon.
CapilèEelektwoforèz
2. an tan reyèl fluorescent quantitative PCR (Quantitative Real-time PCR, qPCR) teknolojiFluoresan PCR quantitative, ki rele tou Real-Time PCR, se yon nouvo teknoloji quantitative asid nikleyè devlope pa PE (Perkin Elmer) an 1995. Istwa devlopman nan PCR quantitative fluorescent se yon istwa nan batay nanm-brase nan gran tankou ABI, Roche, ak Bio-Rad.Si w enterese, ou ka tcheke li.Teknik sa a se kounye a teknik PCR semi-kantitatif ki pi matirite ak lajman itilize.
Machin qPCR rekòmande: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Metòd lank fluorescent (SYBR Green I):SYBR Green I se koloran ki pi souvan itilize DNA-obligatwa pou PCR quantitative, ki mare ki pa espesifikman nan ADN doub-chèn.Nan eta a gratis, SYBR Green emèt fliyoresans fèb, men yon fwa mare ak ADN doub-bloke, fliyoresans li ogmante 1000-pliye.Se poutèt sa, siyal fliyoresan total ki emèt pa yon reyaksyon se pwopòsyonèl ak kantite ADN doub-bloke prezan epi li pral ogmante ak ogmantasyon nan pwodwi anplifye.Depi lank la mare ki pa espesyalman nan ADN doub-chèn, yo ka pwodwi fo rezilta pozitif.
Pwodwi ki gen rapò: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Metòd sonde Fluoresan (Taqman teknoloji): PandanAnplifikasyon PCR, yo ajoute yon pwofonde fliyoresan espesifik an menm tan ak yon pè primè.Pwofonde a se yon oligonukleotid lineyè, ak yon gwoup repòtè fliyoresan ak yon gwoup quencher fliyoresan respektivman make nan tou de bout.Lè sond la entak, siyal fliyoresan emèt pa gwoup repòtè a absòbe gwoup quencher la, ak deteksyon an Pa gen okenn siyal fliyoresan;pandan anplifikasyon PCR (nan etap ekstansyon an), aktivite 5'-3' Dicer nan anzim Taq pral dijere ak degrade pwofonde a, se konsa ke gwoup fluorescent repòtè a ak gwoup fliyoresan quencher yo separe, se konsa ke sistèm siveyans fliyoresan ka resevwa siyal fliyoresan an, se sa ki, chak fwa yon chèn ADN se anplifye, ki se yon siyal fluorescent fluorescent akimilasyon konplè. s ak fòmasyon nan pwodwi PCR.Metòd sonde Taqman se metòd deteksyon ki pi souvan itilize nan deteksyon klinik.
Pwodwi ki gen rapò: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Avantaj qPCR
1.Metòd la gen matirite ak ekipman sipò yo ak reyaktif yo konplè
2.Pri mwayen reyaktif
3.fasil pou itilize
4.Segondè sansiblite deteksyon ak espesifik
Dezavantaj qPCR
Mitasyon nan jèn sib la mennen nan deteksyon rate.
Rezilta deteksyon modèl ki ba konsantrasyon pa ka detèmine.
Gen yon gwo erè lè w ap itilize koub estanda a pou deteksyon quantitative.
3. Digital PCR (dijital PCR, dPCR) teknoloji
Digital PCR se yon teknik pou quantification absoli molekil asid nikleyik.Konpare ak qPCR, PCR dijital ka dirèkteman li kantite molekil ADN / RNA, ki se quantifikasyon absoli molekil asid nikleyik nan echantiyon an kòmanse.An 1999, Bert Vogelstein ak Kenneth W. Kin-zler te pwopoze fòmèlman konsèp dPCR.
An 2006, Fluidigm te premye moun ki pwodui yon enstriman dPCR komèsyal ki baze sou chip.An 2009, Life Technologies te lanse sistèm OpenArray ak QuantStudio 12K Flex dPCR.Nan 2013, Life Technologies te lanse sistèm QuantStudio 3DdPCR, ki sèvi ak teknoloji nanokal microfluidic chip ki gen gwo dansite pou distribye echantiyon yo nan 20,000 selil endividyèl.nan reyaksyon an byen.
Nan 2011, Bio-Rad te lanse enstriman QX100 dPCR ki baze sou ti gout, ki sèvi ak teknoloji dlo-nan-lwil oliv pou distribye echantiyon an respire nan 20,000 gout-dlo-nan-lwil, epi sèvi ak yon analizeur ti gout pou analize ti gout yo.An 2012, RainDance te lanse enstriman RainDrop dPCR a, ki te kondwi pa gaz presyon ki wo, pou divize chak sistèm reyaksyon estanda nan yon emulsyon reyaksyon ki gen 1 milyon a 10 milyon mikwo-goulèt nan nivo pikolit.
Jiskaprezan, PCR dijital te fòme de gwo faksyon, kalite chip ak kalite gout.Kèlkeswa kalite PCR dijital, prensip debaz li yo limite dilution, PCR endpoint ak distribisyon Poisson.Sistèm reyaksyon PCR estanda ki gen modèl asid nikleyik divize an plizyè dizèn milye reyaksyon PCR, ki distribye nan chips oswa microdroplets, pou chak reyaksyon gen ladan l otank posib yon molekil modèl, epi yo fè yon reyaksyon PCR modèl sèl-molekil.Lè w li fluoresans la, yo konte prezans oswa absans siyal la, epi yo fè quantifikasyon absoli apre kalibrasyon distribisyon Poisson estatistik la.
Sa ki annapre yo se karakteristik plizyè platfòm PCR dijital mwen te itilize:
1. Bio-Rad QX200 gout dijital PCR Bio-RadQX200 se yon platfòm PCR dijital trè klasik, pwosesis deteksyon debaz la: 20,000 echantiyon yo pwodwi pa dèlko ti gout dlo-nan-lwil oliv mikwo-gout yo anplifye sou yon machin PCR òdinè, epi finalman siyal fliyoresan chak mikwo-goutte li pa yon lektè mikwo-goutte.Operasyon an se pi konplike, ak risk pou polisyon se mwayen.
Xinyi TD1 mikwo-gout PCR dijitalXinyi TD1 se yon platfòm PCR dijital domestik, pwosesis deteksyon debaz la: jenere 30,000-50,000 ti gout dlo-nan-lwil oliv atravè yon dèlko ti gout, anplifye sou yon enstriman PCR komen, epi finalman pase Lektè a ti gout li siyal fliyoresan nan chak ti gout.Tou de jenerasyon ti gout ak lekti nan platfòm sa a yo fèt nan yon chip devwe ak risk ki ba pou kontaminasyon.
STILLA Naica micro-goutte chip digital PCRSTILLA Naica se yon platfòm PCR dijital relativman nouvo.Pwosesis deteksyon debaz la se: ajoute solisyon an reyaksyon nan chip la, mete chip la nan jenerasyon an mikwo-goutte ak sistèm anplifikasyon, ak jenere 30,000 mikwo-gout.Gaye sou chip la, epi anplifikasyon PCR fini sou chip la.Lè sa a, chip anplifye a transfere nan sistèm analiz lekti mikwo-gout la, epi li siyal fliyoresan an pa pran foto.Depi tout pwosesis la pran plas nan yon chip fèmen, risk pou kontaminasyon se ba.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D chip dijital PCR
ThermoFisher QuantStudio 3D se yon lòt platfòm PCR dijital ki baze sou chip klasik.Pwosesis deteksyon debaz li yo se: ajoute solisyon reyaksyon an nan epandeuz la, epi gaye solisyon reyaksyon an respire sou chip la ak 20,000 microwells nan epandeuz la., mete chip la sou machin nan PCR anplifye, epi finalman mete chip la nan lektè a epi pran yon foto li siyal la fliyoresan.Operasyon an se relativman konplike, ak tout pwosesis la te pote soti nan yon chip fèmen, ak risk pou kontaminasyon se ba.
5. JN MEDSYS Clarity chip dijital PCR
JN MEDSYS Clarity se yon relativman nouvo chip-type dijital PCR platfòm.Pwosesis deteksyon debaz li yo se: ajoute solisyon an reyaksyon nan aplikatè a, epi gaye solisyon reyaksyon an respire sou 10,000 tib PCR fiks nan tib PCR la atravè aplikatè a.Sou chip microporous la, solisyon reyaksyon an antre nan chip nan aksyon kapilè, epi yo mete tib PCR la ak chip la sou machin PCR la pou anplifikasyon, epi finalman chip la mete nan lektè a pou li siyal fliyoresan an pa pran yon foto.Operasyon an pi konplike.Risk pou kontaminasyon an ba.
Paramèt chak platfòm PCR dijital yo rezime jan sa a:
Endikatè evalyasyon yo nan platfòm PCR dijital la se: kantite inite fann, kantite chanèl fliyoresan, konpleksite nan operasyon ak risk pou kontaminasyon.Men, bagay ki pi enpòtan an se presizyon deteksyon an.Youn nan fason yo evalye platfòm PCR dijital se sèvi ak plizyè platfòm PCR dijital pou verifye youn ak lòt, ak yon lòt fason se sèvi ak sibstans estanda ak valè egzat.
Avantaj nan dPCR
1.Reyalizasyon quantification absoli
2.Pi wo sansiblite ak espesifik
3.Ka detekte echantiyon kopi ba
Dezavantaj nan dPCR1. Ekipman chè ak reyaktif 2. Operasyon konplike ak tan deteksyon long 3. Ranje deteksyon etwat
Koulye a, twa jenerasyon teknoloji PCR yo gen avantaj ak dezavantaj pwòp yo, epi chak gen pwòp jaden aplikasyon li yo, epi li pa yon relasyon ke yon jenerasyon ranplase lòt la.Avansman kontinyèl teknoloji a enjekte nouvo vitalite nan teknoloji PCR, sa ki pèmèt li déblotché yon direksyon aplikasyon apre lòt, sa ki fè deteksyon asid nikleyik pi pratik ak egzat.
Sous: Doktè Yuan pran ou pou tès la
Pwodwi Rekòmande:
Tan pòs: 18-Nov-2022
