Eksplikasyon tèm debaz byoloji molekilè
1. cDNA ak cccDNA: cDNA se yon ADN doub-chèn sentèz pa transkriptaz ranvèse soti nan mRNA;cccDNA se yon plasmid ADN sikilè fèmen doub-chachen ki pa gen kwomozòm nan.
2. Inite plisman estanda: inite estrikti segondè pwoteyin α-helix ak β-fèy ka fòme blòk estriktirèl ak aranjman espesyal jewometrik atravè divès polipèptid konekte.Sa a kalite detèmine plisman anjeneral rele super segondè estrikti.Prèske tout estrikti siperyè yo ka dekri pa kalite sa yo plisman, e menm kalite konbine yo, kidonk yo rele yo tou inite estanda plisman.
3. CAP: cyclic adenosine monophosphate (cAMP) reseptè pwoteyin CRP (cAMP reseptè pwoteyin), yo rele konplèks ki fòme apre konbinezon an nan cAMP ak CRP aktive pwoteyin CAP (cAMP aktive pwoteyin)
4. Sekans palindromik: Sekans konplemantè ranvèse yon segman yon fragman ADN, souvan yon sit anzim restriksyon.
5. micRNA: Konplemantè entèferans RNA oswa RNA antisans, ki se konplemantè ak sekans mRNA a epi li ka anpeche tradiksyon mRNA an.
6. Ribozyme: RNA ak aktivite katalitik, ki jwe yon wòl otokatalitik nan pwosesis splicing RNA.
7. Motif: Gen kèk rejyon lokal ki gen menm fòm twa dimansyon ak topoloji nan estrikti espasyal molekil pwoteyin.
8. Siyal peptide: yon peptide ki gen 15-36 résidus asid amine nan N-tèminal pandan sentèz pwoteyin, ki gide transmembran pwoteyin nan.
9. Atenuateur: Yon sekans nukleotid ant yon rejyon operatè ak yon jèn estriktirèl ki mete fen nan transcription.
10. Tach majik: Lè bakteri an grandi epi rankontre yon mank konplè nan asid amine, bakteri yo pral pwodwi yon repons ijans pou sispann ekspresyon tout jèn yo.Siyal ki jenere repons ijans sa a se guanosine tetraphosphate (ppGpp) ak guanosine pentaphosphate (pppGpp).Wòl PpGpp ak pppGpp se pa sèlman youn oswa kèk operon, men afekte yon gwo kantite yo, kidonk yo rele yo super-regilatè oswa tach majik.
11. Eleman pwomotè en: refere a sekans ADN ki jwe yon wòl regilasyon nan aktivite pwomotè a, tankou TATA nan rejyon -10, TGACA nan rejyon -35, améliorant, ak atenuateur.
12. Sond ADN: yon segman ADN ki make ak yon sekans li te ye, ki lajman itilize pou detekte sekans enkoni ak jèn sib ekran.
13. SD sekans: Li se sekans obligatwa ribosome ak mRNA, ki kontwole tradiksyon.
14. Antikò monoklonal: Yon antikò ki aji sèlman kont yon sèl detèminan antijenik.
15. Kosmid: Li se yon vektè ADN ekzojèn ki konstwi atifisyèlman ki kenbe rejyon COS yo nan tou de bout faj la epi ki konekte ak plasmid la.
16. Tès ble-blan tach: LacZ jèn (kode β-galactosidase), anzim la ka dekonpoze substra chromogenic X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) pou pwodwi ble, konsa fè souch la ble.Lè yo mete ADN nan ekzojèn, jèn LacZ pa ka eksprime, ak souch la blan, konsa tankou ekran bakteri recombinant yo.Yo rele sa tès depistaj ble-blan.
17. Eleman ki aji cis: Yon sekans espesifik baz nan ADN ki kontwole ekspresyon jèn.
18. Anzim Klenow: Gwo fragman DNA polymerase I, eksepte ke aktivite eksonukleaz 5' 3' yo retire nan oloenzym DNA polymerase I.
19. Anchored PCR: itilize pou anplifye ADN ki enterese a ak yon sekans li te ye nan yon bout.Yo te ajoute yon ke poly-dG nan yon bout nan sekans enkoni a, ak Lè sa a, poly-dC a ak sekans li te ye a te itilize kòm primè pou anplifikasyon PCR.
20. Pwoteyin fizyon: Jèn nan pwoteyin ekaryotik konekte ak jèn ekzojèn, ak pwoteyin ki konpoze de tradiksyon an nan pwoteyin jèn orijinal ak pwoteyin ekzojèn eksprime an menm tan an.
Lòt tèm biyoloji molekilè
1. Kat fizik ADN se lòd kote (restriksyon endonukleaz dijere) fragman molekil ADN yo ranje.
2. Se klivaj la nan RNase divize an de kalite (autocatalysis) ak (heterocatalysis).
3. Gen twa faktè inisyasyon nan prokaryot yo se (IF-1), (IF-2) ak (IF-3).
4. Transmembrane pwoteyin mande pou konsèy (peptides siyal), ak wòl nan chaperones pwoteyin se (ede yo pliye chèn nan peptide nan konfòmasyon natif natal nan pwoteyin nan).
5. Eleman nan pwomotè ka jeneralman divize an de kalite: (eleman debaz pwomotè) ak (eleman pwomotè en).
6. Kontni rechèch la nan byoloji molekilè sitou gen ladan twa pati: (biyoloji molekilè estriktirèl), (ekspresyon jèn ak règleman), ak (teknoloji recombination DNA).
7. De eksperyans kle yo demontre ke ADN se materyèl jenetik la se (enfeksyon pneumococcus nan sourit) ak (T2 phage enfeksyon nan Escherichia coli).potansyèl).
8. Gen de diferans prensipal ant hnRNA ak mRNA: (hnRNA se spliced nan pwosesis konvèti an mRNA), (fen 5' mRNA a ajoute ak yon bouchon m7pGppp, epi gen yon poliadenilasyon siplemantè nan fen 3' nan ke asid mRNA (polyA)).
9. Avantaj ki genyen nan fòm milti-subunit pwoteyin yo se (sous-inite se yon metòd ekonomik pou itilizasyon ADN), (ka redwi enpak erè o aza nan sentèz pwoteyin sou aktivite pwoteyin), (aktivite ka trè efikas ak rapidman yo louvri epi fèmen).
10. Kontni prensipal la nan mekanis plisman pwoteyin premye teyori nikleyasyon gen ladan (nukleasyon), (anrichisman estriktirèl), (reranje final).
11. Galaktoz gen yon efè doub sou bakteri;sou yon bò (li ka itilize kòm yon sous kabòn pou kwasans selil);nan lòt men an (li se tou yon eleman nan miray selil la).Se poutèt sa, yon pwomotè cAMP-CRP-endepandan S2 nesesè pou sentèz la pèmanan nan nivo background;an menm tan an, yon pwomotè S1 ki depann de cAMP-CRP nesesè pou kontwole sentèz wo nivo a.Transkripsyon kòmanse nan (S2) ak G ak soti nan (S1) san G.
12. Teknoloji ADN recombinant yo konnen tou kòm (klonaj jèn) oswa (klonaj molekilè).Objektif final la se (transfere enfòmasyon jenetik ADN nan yon òganis nan yon lòt òganis).Yon eksperyans recombination ADN tipik anjeneral gen ladan etap sa yo: (1) Ekstrè jèn sib la (oswa jèn ekzojèn) òganis donatè a, epi konekte li anzimatikman ak yon lòt molekil ADN (vektè klonaj) pou fòme yon nouvo molekil ADN recombinant.② Molekil ADN recombinant la transfere nan selil moun k ap resevwa a epi li replike nan selil k ap resevwa a.Pwosesis sa a rele transfòmasyon.③ Ekzamen epi idantifye selil ki resevwa yo ki te absòbe ADN recombinant la.④Kultive selil ki gen ADN recombinant an gwo kantite pou detekte si jèn èd etranje a eksprime.
13. Gen de kalite replikasyon plasmid: sa yo ki entèdi kontwole pa sentèz pwoteyin selil lame yo rele (plasmid sere), ak sa yo ki pa estrikteman kontwole pa sentèz pwoteyin selil lame yo rele (plasmid rilaks).
14. Sistèm reyaksyon PCR la ta dwe gen kondisyon sa yo: a.Jadendanfan ADN (apeprè 20 baz) ak sekans konplemantè nan chak pwent de seksyon jèn sib yo dwe separe.b.Anzim ak estabilite tèmik tankou: TagDNA polymerase.c, dNTPd, ADN sekans enterè kòm modèl
15. Pwosesis reyaksyon debaz PCR la gen ladan twa etap: (denaturasyon), (annealing), ak (ektansyon).
16. Pwosesis debaz bèt transjenik yo anjeneral gen ladan: ①Entwodiksyon jèn etranje klonnen nan nwayo yon ze fètilize oswa yon selil souch anbriyon;②Transplantasyon ze fètilize inokulasyon an oswa selil souch anbriyon an nan matris fi a;③Devlopman anbriyon konplè ak kwasans Pou pitit pitit ki gen jèn etranje;④ Sèvi ak bèt sa yo ki ka pwodui pwoteyin etranje kòm bèt elvaj pou kwaze nouvo liy omozigòt.
17. Liy selil Hybridoma yo pwodwi pa ibrid (larat B) selil ak selil (myeloma), epi depi (selil larat) ka itilize ipoxantin ak (selil zo) bay fonksyon divizyon selilè, yo ka grandi nan mwayen HAT.grandi.
18. Ak grandisan rechèch la, yo rele premye jenerasyon an nan antikò (antikò poliklonal), dezyèm jenerasyon an (antikò monoklonal), ak twazyèm jenerasyon an (antikò jeni jenetik).
19. Kounye a, jeni jenetik viris ensèk se sitou konsantre sou baculovirus, ki se manifeste nan entwodiksyon de (jèn toksin ekzojèn);(jenn ki deranje sik lavi nòmal ensèk yo);(modifikasyon jèn viris).
20. Faktè pwoteyin trans-aji ki koresponn ak eleman komen TATA, GC, ak CAAT nan pwomotè mamifè RNA polymerase II a se (TFIID), (SP-1) ak (CTF/NF1), respektivman.
venn yon sèl.Faktè transkripsyon debaz RNA polymerase Ⅱ yo se, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, ak sekans obligatwa yo se: (D, A, B, E).Ki kote fonksyon TFII-D se (obligatwa nan bwat TATA).
vennde.Pifò nan faktè transkripsyon ki mare ak ADN travay sou fòm dimè.Domèn fonksyonèl nan faktè transkripsyon ki mare ak ADN yo souvan sa ki annapre yo (helix-vire-helix), (motif dwèt zenk), (debaz-leucine) zip motif).
venntwa.Gen twa kalite restriksyon mòd klivaj endonukleaz: (koupe nan 5' bò aks simetri a pou jenere 5' bout kolan), (koupe nan bò 3' aks simetri a pou jenere 3' bout kolan (koupe nan aks simetri pou jenere segman plat)).
vennkat.Plasmid DNA gen twa diferan configurations: (SC configuration), (oc configuration), (L configuration).Premye a nan elektwoforèz se (SC konfigirasyon).
25. sistèm ekspresyon jèn ekzojèn, sitou (Escherichia coli), (Ledven), (Ensèk) ak (Tablo selil mamifè).
26. Metòd yo souvan itilize pou bèt transjenik yo se: (metòd enfeksyon retwoviral), (metòd mikro-enjeksyon ADN), (metòd selil souch anbriyon).
Aplikasyon Molekilè byoloji
1. Bay non fonksyon plis pase 5 RNA?
Transfè RNA tRNA Transfè asid amine Ribosome RNA rRNA Ribozom konstitye mesaje RNA mRNA Pwoteyin sentèz modèl Eterogène nikleyè RNA hnRNA Précurseur de mRNA ki gen matirite ti nikleyè RNA snRNA Patisipe nan hnRNA splicing Ti sitoplasmik RNA scRNA/7SL-RNA pwoteyin Konpozan Plasma retikul ak sintèz retikul RNA rekonesans kò anti-RNA rekonesans ekspresyon Ribozyme RNA Enzymatically active RNA
2. Ki diferans prensipal ant pwomotè pwokaryotik ak ekaryotik?
Prokaryotic TTGACA --- TATAAT------Initiation Site-35 -10 Eukaryotic Enhancer---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Initiation Site-110 -70 -25
3. Ki aspè prensipal yo nan konstriksyon atifisyèl nan plasmid natirèl?
Plasmid natirèl yo souvan gen defo, kidonk yo pa apwopriye pou itilize kòm transpòtè pou jeni jenetik, epi yo dwe modifye ak konstwi: a.Ajoute jèn makè seleksyon apwopriye, tankou de oswa plis, ki fasil pou itilize pou seleksyon, anjeneral, jèn antibyotik.b.Ogmante oswa diminye sit apwopriye koupe anzim pou fasilite rekonbinasyon.c.Vin pi kout longè a, koupe fragman ki pa nesesè yo, amelyore efikasite enpòte a ak ogmante kapasite chaj la.d.Chanje replikon an, soti nan sere a ki lach, soti nan mwens kopi a plis kopi.e.Ajoute eleman jenetik espesyal selon kondisyon espesyal jeni jenetik
4. Bay yon egzanp yon metòd pou tès depistaj diferans nan tisi-espesifik cDNA?
De popilasyon selil yo prepare, jèn sib la eksprime oswa trè eksprime nan youn nan selil yo, ak jèn sib la pa eksprime oswa eksprime piti nan lòt selil la, ak Lè sa a, jèn sib la jwenn pa ibridizasyon ak konparezon.Pou egzanp, pandan ensidan an ak devlopman nan timè, selil timè yo pral prezante mRNAs ak nivo ekspresyon diferan pase selil nòmal yo.Se poutèt sa, jèn ki gen rapò ak timè yo ka tès depistaj pa ibridizasyon diferans.Metòd endiksyon an ka itilize tou pou detekte jèn yo pwovoke ekspresyon yo.
5. Jenerasyon ak tès depistaj liy selil ibridòm?
Selil larat B + selil myelom, ajoute polyethylene glycol (PEG) pou ankouraje fizyon selilè, ak selil fizyon larat B-myeloma yo grandi nan mwayen HAT (ki gen hypoxanthine, aminopterin, T) kontinye elaji nouri.Fizyon selil la gen ladan: selil fizyon larat-larat: pa kapab grandi, selil larat pa kapab kiltive nan vitro.Selil fizyon zo-zo: pa ka itilize ipoxantin, men yo ka fè sentèz purin atravè dezyèm chemen an lè l sèvi avèk folat reduktaz.Aminopterin inibit folat reduktaz e konsa pa ka grandi.Selil fizyon zo-larat: ka grandi nan HAT, selil larat yo ka itilize ipoxantin, ak selil zo yo bay fonksyon divizyon selilè.
6. Ki prensip ak metòd pou detèmine estrikti prensipal ADN nan metòd tèminal dideoxy (metòd Sanger)?
Prensip la se sèvi ak yon terminateur chèn nukleotid—2,,3,-dideoxynucleotide pou mete fen nan ekstansyon ADN.Depi li manke 3-OH ki nesesè pou fòmasyon lyezon 3/5/phosphodiestè, yon fwa enkòpore nan chèn ADN, chèn ADN pa ka pwolonje plis.Dapre prensip la nan pè baz, chak fwa ADN polymerase bezwen dNMP pou patisipe nan chèn ADN nòmalman pwolonje, gen de posiblite, youn se patisipe nan ddNTP, ki rezilta nan revokasyon ekstansyon chèn deoxynucleotide;lòt la se patisipe nan dNTP , pou chèn ADN an ka toujou kontinye pwolonje jiskaske pwochen ddNTP a enkòpore.Dapre metòd sa a, yo ka jwenn yon gwoup fragman ADN ki gen longè diferan ki fini nan ddNTP.Metòd la se divize an kat gwoup respektivman ddAMP, ddGMP, ddCMP, ak ddTMP.Apre reyaksyon an, elektwoforèz jèl poliakrilamid ka li sekans ADN la dapre gwoup naje yo.
7. Ki efè regilasyon pozitif pwoteyin activator (CAP) sou transcription?
Cyclic adenylate (cAMP) reseptè pwoteyin CRP (cAMP reseptè pwoteyin), konplèks ki fòme pa konbinezon an nan cAMP ak CRP yo rele CAP (cAMPactivated pwoteyin).Lè E. coli grandi nan yon mwayen ki manke glikoz, sentèz CAP ogmante, epi CAP gen fonksyon aktive pwomotè tankou laktoz (Lac).Kèk pwomotè CRP-depandan manke karakteristik sekans rejyon -35 tipik (TTGACA) ke pwomotè komen genyen.Se poutèt sa, li difisil pou RNA polymerase mare li.Prezans CAP (fonksyon): ka siyifikativman amelyore konstan obligatwa anzim ak pwomotè.Li sitou montre de aspè sa yo: ① CAP ede molekil anzim lan oryante kòrèkteman pa chanje konfòmasyon pwomotè a ak entèraksyon an ak anzim la, konsa tankou konbine ak rejyon an -10 epi jwe wòl nan ranplase fonksyon an nan rejyon an -35.②CAP kapab tou anpeche lyezon RNA polymerase nan lòt sit nan ADN, kidonk ogmante pwobabilite pou lye ak pwomotè espesifik li yo.
8. Ki etap yo anjeneral enkli nan yon eksperyans recombinasyon ADN tipik?
a.Ekstrè jèn sib (oswa jèn ekzojèn) òganis donatè a, epi konekte li anzimatikman ak yon lòt molekil ADN (vektè klonaj) pou fòme yon nouvo molekil ADN recombinant.b.Transfere molekil ADN recombinant la nan selil benefisyè a epi replike epi konsève li nan selil resevwa a.Pwosesis sa a rele transfòmasyon.c.Ekzamen epi idantifye selil ki resevwa yo ki te absòbe ADN recombinant la.d.Kilti an mas selil ki genyen ADN recombinant pou detekte si jèn èd etranje a eksprime.
9. Konstriksyon bibliyotèk jèn yo bay twa metòd pou tès depistaj recombinants epi yo dekri yon ti tan pwosesis la.
Depistaj rezistans antibyotik, inaktivasyon ensèsyon rezistans, tès depistaj tach ble-blan oswa PCR, tès depistaj diferans, ankèt ADN Pifò vektè klonaj pote jèn rezistans antibyotik (anti-anpisilin, tetracycline).Lè plasmid la transfere nan Escherichia coli, bakteri yo pral jwenn rezistans, ak moun ki pa transfere pa pral gen rezistans.Men, li pa ka distenge si li te reòganize oswa ou pa.Nan yon vektè ki gen de jèn rezistans, si yo mete yon fragman ADN etranje nan youn nan jèn yo epi li lakòz jèn nan inaktive, yo ka itilize de kontwòl plak ki gen diferan dwòg pou detekte recombinants pozitif.Pou egzanp, plasmid pUC la gen jèn LacZ (kode β-galactosidase), ki ka dekonpoze substra chromogenic X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indol-β-D-galactoside) pou pwodui ble, kidonk vire souch la ble.Lè yo mete ADN etranje a, jèn LacZ pa ka eksprime, ak souch la blan, konsa tankou tès bakteri recombinant yo.
10. Esplike pwosesis debaz pou jwenn bèt transjenik atravè selil souch anbriyon?
Selil souch anbriyon (ES) yo se selil anbriyon pandan devlopman anbriyon, ki ka kiltive atifisyèlman ak pwopagasyon epi ki gen fonksyon diferansye nan lòt kalite selil.Kilti selil ES yo: Mas selil anndan blastocyst la izole ak kiltive.Lè ES kiltive nan yon kouch feeder-gratis, li pral diferansye nan divès selil fonksyonèl tankou selil nan misk ak selil N.Lè kiltive nan yon mwayen ki gen fibroblast, ES ap kenbe fonksyon diferansyasyon an.ES ka jenetikman manipile, ak fonksyon diferansyasyon li yo ka entegre san yo pa afekte fonksyon diferansyasyon li yo, ki rezoud pwoblèm nan nan entegrasyon o aza.Entwodwi jèn ekzojèn yo nan selil souch anbriyon yo, Lè sa a, implant nan matris sourit fi ansent, devlope nan tichyen, epi kwaze pou jwenn sourit omozigòt.
