Verifye pèfòmans primè ak sond nan etap bonè nan reyaktif PCR ak detèmine kondisyon reyaksyon ki pi apwopriye yo se kondisyon yo pou asire pwogrè lis nan eksperyans fòmèl.
Se konsa, ki jan nou bezwen konfime pwofonde primè a nan premye etap la?
Endikatè prensipal yo se debaz, koub anplifikasyon, valè ct, efikasite anplifikasyon, deteksyon echantiyon ba-konsantrasyon, CV, elatriye.
Debaz
Liy debaz la se liy orizontal nan koub anplifikasyon PCR la.Nan premye sik reyaksyon anplifikasyon PCR la, siyal fliyoresan an pa chanje anpil epi li fòme yon liy dwat.Liy dwat sa a se liy debaz la.
Lè tès depistaj PCR primè, peye atansyon sou si debaz la nivo.Pite konsantrasyon pwofonde primè a pral afekte liy debaz la, tankou sa ki lakòz liy debaz la monte oswa tonbe.Debaz la se tou yon endikatè trè entwisyon.
Koub anplifikasyon
Yon lòt endikatè entwisyon se fòm koub anplifikasyon an.Li pi bon pou gen yon koub ki gen fòm S pou evite anplifikasyon segondè oswa lòt koub anplifikasyon nòmal.
Valè Ct
Kantite sik ki koresponn ak pwen enfleksyon soti nan liy debaz la jiska kwasans eksponansyèl la se valè Ct la.
Pou menm echantiyon an, diferan sond Jadendanfan lakòz diferan koub anplifikasyon, ak valè Ct ki koresponn lan pral afekte pa efikasite anplifikasyon ak degre entèferans.Nan teyori, pi piti valè Ct nan pwofonde Jadendanfan nou chwazi a, pi bon an.
Efikasite anplifikasyon
Youn nan metòd ki pi serye ak ki estab pou evalye efikasite anplifikasyon PCR se koub estanda a, ki se tou lajman rekonèt pa chèchè yo.Metòd la enplike fè yon seri echantiyon pou kontwole kantite relatif modèl sib yo.Echantiyon sa yo anjeneral fèt pa dilusyon seri nan solisyon stock konsantre, pi souvan itilize a se dilution 10-pliye.Sèvi ak yon seri echantiyon dilye, lè l sèvi avèk pwogram qPCR estanda pou anplifye pou jwenn valè Cq, epi finalman trase yon koub estanda dapre konsantrasyon chak echantiyon ak valè Cq ki koresponn lan pou jwenn ekwasyon lineyè Cq = -klgX0 + b, ak efikasite anplifikasyon E = 10 (-1 / k) -1.Lè w ap itilize qPCR pou analiz quantitative, efikasite anplifikasyon an oblije nan ranje 90% -110% (3.6> k> 3.1).
Deteksyon echantiyon ki ba-konsantrasyon
Lè konsantrasyon echantiyon an ba, pousantaj deteksyon diferan sond Jadendanfan diferan.Nou chwazi 20 echantiyon ki ba konsantrasyon pou repwodui, epi sistèm primè-sond ki gen pi gwo pousantaj deteksyon an se pi bon an.
Koefisyan varyasyon (CV)
Yo ka detekte 10 echantiyon kopi ak diferan sond Jadendanfan selon estanda liy reyaktif la pou deteksyon anplifikasyon asid nikleyik.
Reyaktif Kantitatif:
Presizyon
Presizyon nan yon pakèt ta dwe satisfè: koyefisyan varyasyon (CV,%) valè logaritmik konsantrasyon tès la se ≤5%.Lè konsantrasyon echantiyon an ba, koyefisyan varyasyon (CV,%) logaritm konsantrasyon deteksyon an se ≤10%
Reyaktif kalitatif:
Presizyon
Presizyon nan yon pakèt ta dwe satisfè:
(1) Koefisyan varyasyon valè Ct (CV,%) ≤5%
Yo teste menm echantiyon an paralèl pou 10 fwa, epi rezilta tès yo ta dwe konsistan
Tan pòs: 18-Sep 2021
