Plon

Long RNA ki pa kode, lncRNA se yon RNA ki pa kode ak yon longè ki pi gran pase 200 nukleotid, jeneralman ant 200-100000 nt.lncRNA kontwole ekspresyon jèn nan nivo epigenetik, transkripsyon ak pòs-transkripsyon, epi li patisipe nan silans kwomozòm X, anprent genomic ak modifikasyon kwomatin, aktivasyon transkripsyon, entèferans transkripsyon, transpò nikleyè, règleman sik selilè, règleman diferansyasyon selilè, ak efè konpansasyon dòz (efè konpansasyon dòz) ak anpil lòt règleman enpòtan ki gen rapò ak devlopman ak prevansyon imen. pwen cho yo nan jaden an nan byomedsin.

01  Kalite ak karakteristik LncRNA

lncRNA divize an plizyè kalite selon diferan sous fòmasyon li yo, jan yo montre nan figi ki anwo a.Gen karakteristik sa yo:

1. lncRNA yo anjeneral pi long, ak ekspresyon dinamik ak metòd splicing diferan pandan diferansyasyon
2. Konpare ak jèn kodaj, lncRNA anjeneral gen yon nivo ekspresyon ki pi ba
3. Pifò lncRNA yo gen espesifik ekspresyon tanporèl ak espasyal nan pwosesis diferansyasyon ak devlopman tisi.
4. Gen ekspresyon karakteristik nan timè ak lòt maladi
5. Kote subselilè lncRNA yo divès
6. Sekans lan ba nan konsèvasyon, men fonksyon an gen yon sèten degre konsèvasyon, elatriye.

02 Kesyon yo poze souvan sou transkripsyon ranvèse LncRNA

Akòz kontni ki ba nan lncRNA nan selil, longè longè ak estrikti wo nivo, RNA sa yo souvan gen estrikti konplèks tankou bouk tij oswa epeng cheve, ak RT-qPCR se tendans pwoblèm nan transcription ranvèse san siksè oswa efikasite ki ba.

03 Solisyon transkripsyon ranvèse LncRNA

Nan règ santral la, yo rele pwosesis viris RNA yo itilize pwòp transkriptaz ranvèse yo pou fè sentèz ADN lè l sèvi avèk RNA kòm yon modèl.Pwosesis itilize RNA viris ranvèse transkriptaz pou fè sentèz modèl cDNA an vitro yo rele transkripsyon ranvèse.Eleman prensipal yo enkli nan sistèm transkripsyon ranvèse a: modèl RNA, transkriptaz ranvèse, primè ak lòt konpozan.

1.RNA modèl

Enfliyans modèl RNA sou transkripsyon ranvèse reflete nan estrikti li yo, pite ak entegrite.Plis pite ak entegrite extrait RNA a, se pi wo efikasite transkripsyon ranvèse ak pi egzak rezilta quantitative ki vin apre yo.RNA a pirifye pa reyaktif ekstraksyon RNA souvan itilize souvan gen résidus nan alkòl ak sèl guanidine, ki gen yon gwo efè inhibition sou pifò transkriptaz ranvèse.

2.Reverse transcriptase

Reverse transcriptase gen yon enfliyans kle nan tout sistèm transkripsyon ranvèse.Tanperati apwopriye pou transkriptaz ranvèse yo itilize nan pifò laboratwa se jeneralman 42 ° C.An reyalite, ouvèti estrikti RNA wo nivo a mande pou yon tanperati ki pi wo, ak kondisyon pou transkriptaz ranvèse a pi wo.

3.Jadendanfan

Jadendanfan transkripsyon ranvèse gen ladan primè-espesifik jèn, primè o aza ak primè Oligo dT.Pifò lncRNA yo pa genyen ke polyA, epi li enpòtan pou byen matche ak primè o aza ak Oligo dT.

4.Other konpozan

Nan sans de lefèt ke RNA se patikilyèman fasil degrade, entwodiksyon an nan eleman nan sistèm nan transcription ranvèse ka minimize, sa ki ka efektivman anpeche antre nan RNase ak asire pwogrè nan lis nan transcription ranvèse.

Foregenejwenn nan modèl RNA, transkripsyon ranvèse nan qPCR

Konplètman eskòte deteksyon lncRNA ou a

Animal Total RNA IsolasyonTwous (ak kolòn pou retire gDNA)

RNA total selilè IsolasyonTwous (ak kolòn pou retire gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (Avèk gDNase) (Super Premix pou premye-seksyon cDNA sentèz soti nan lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Aavantaj ofEkstraksyon RNA:

Twous la sèvi ak teknoloji ekstraksyon RNA twazyèm jenerasyon an, pa bezwen sèvi ak DNase.

11 minit soti nan 96, 24, 12, ak 6-byen plak kiltive selil, ekstraksyon segondè-efikasite nan gDNA-gratis, segondè-pite,-wo kalite total RNA selil.

Avantaj nan transcription ranvèse lncRNA:

Yon sistèm transkripsyon ranvèse espesyalman devlope pou LncRNA byen vit retire kontaminasyon ADN jenomik.

Sistèm transkripsyon ranvèse a gen gwo estabilite tèmik epi li toujou gen bon pèfòmans transcription ranvèse nan 50 ° C.

Modèl ki gen gwo kontni GC ak estrikti segondè konplèks yo ka ranvèse ak efikasite segondè.

Avantajof qPCR:

Hot Start Foregene Taq Polymerase gen pi wo efikasite anplifikasyon, pi wo sansiblite anplifikasyon, ak pi wo espesifik anplifikasyon.

Optimisé Real PCR Easy Mix la fè SYBR Green mwen gen pi wo sansiblite deteksyon, ak entansite fliyoresan li se 3-5 fwa sa yo ki nan pwodwi menm jan an, ki ka satisfè bezwen yo nan diferan kalite eksperyans fliyoresan quantitative.