Entwodiksyon:

RNA, non syantifik asid ribonukleik, abrevyasyon li soti nan asid RiboNucleic, se yon kalite asid nikleyik ki fòme pa konekte omwen plizyè douzèn ribonukleotid atravè lyezon fosfodiestè.

Premis pou eksplore RNA se ekstrè RNA total san polisyon, epi prensip debaz ekstraksyon RNA yo ka apeprè rezime jan sa a:

1. Deranje selil yo an premye

2. Lè sa a, retire enpurte makromolekilè (pwoteyin, lipid, ADN, elatriye)

3. Finalman, RNA a presipite pandan y ap retire sèl ak solvang òganik, epi pirifye plis RNA a.

Sot pase ak prezan nan metòd ekstraksyon

Premye jenerasyon metòd ekstraksyon RNA se metòd presipitasyon TRIzol (reyaktif yo itilize yo enkli guanidine isothiocyanate, fenol, klowofòm, elatriye) envante pa yon granpapa yo te rele Piotr Chomczynski ak granmè Nicoletta Sacchi, paske envansyon sa a pèmèt ekstraksyon RNA rapid ak fasil, depi lè sa a te kòmanse ogmantasyon nan rechèch RNA.

Apre sa, granpapa te vann patant sa a bay Invitrogen, e Invitrogen te ankouraje metòd sa a nan mond lan e li te vin tounen yon metòd lajman itilize.

Apre sa, Thermo te achte Invitrogen!

Reprezantan pwodwi: reyaktif TRIzol Invitrogen a

Sepandan, metòd presipitasyon TRIzol la mande pou plizyè presipitasyon ak ekstraksyon RNA, ak reyaktif yo itilize yo toksik epi yo pran yon bon bout tan pou opere.

Se poutèt sa, metòd pou pirifye kolòn-anzim dezyèm jenerasyon an te vin kreye, lè l sèvi avèk manbràn jèl silica kòm yon materyèl espesifik adsorption asid nikleyè pou maksimize rekiperasyon RNA nan echantiyon an pandan y ap retire lòt enpurte.

Metòd dezyèm jenerasyon an senplifye operasyon an sou baz pèfòmans ki estab, diminye faktè risk, ak amelyore efikasite ekstraksyon RNA.

Pwodwi reprezantan: QIAGEN RNeasy ak pifò pwodwi domestik

Sepandan, tou de metòd yo premye ak dezyèm jenerasyon mande pou itilize DNase pou retire kontaminasyon ADN, ki pote kèk deranjman nan eksperyans ki vin apre en.DNase rezidyèl pral diminye efikasite nan transcription ranvèse epi redwi sentèz cDNA premye-seksyon an, kidonk afekte presizyon nan rezilta yo.

Se poutèt sa, metòd ekstraksyon twazyèm jenerasyon an optimize sou baz dezyèm jenerasyon an.Eksperyans lan pa bezwen ajoute nenpòt anzim, epi RNA ka fasil jwenn ak sèlman de kolòn.

Kolòn 1: Kolòn netwayaj ADN pou netwaye ADN

Kolòn 2: RNA-sèlman Kolòn espesyalman adsorbe ak refè RNA

Yon operasyon senp konsa pa sèlman ekonomize tan, men tou, fasilite operasyon an nan eksperyans en!

Pwodwi reprezantan: QIAGEN RNeasy Plus akForegeneRNA pirifikasyon seri pwodwi yo

（RNeasy Plus）

（Foregene aTwous Izolasyon RNA Total Plant）

Di w tou dousman!Twous RNA Foregene a prezante tou yon gonm RNase super fasil-a-itilize, ki ka konplètman retire 400μg RNase sou sifas solid la nan 1 minit, san yo pa ajoute okenn sibstans toksik nan kò imen an!

Pic1: Tablo konparezon pwosesis operasyonèl

Pwodwi Foregene yo ka konplete ekstraksyon RNA nan jis de chante, pa fè lòt moun fè jalouzi pou pwogrè eksperyans ou!

Pic2:Erezilta eksperimantal yo tablo konparezon

Premye jenerasyon an (1: TRIzol)

Dezyèm jenerasyon an (2: RNeasy nan QIAGEN)

Twazyèm jenerasyon an (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Pic3: graf qPCR (graf koub anplifikasyon)

Premye jenerasyon an (vèt vle di TRIzol -, wouj vle di TRIzol +)

Dezyèm jenerasyon an (syèl ble vle di QIAGEN RNeasy-, wouj vle di QIAGEN RNeasy +)

Twazyèm jenerasyon an (ble vle di QIAGEN RNeasy plis, vèt vle di Foregene)

(Remak: graf qPCR "-" endike ke DNase pa te ajoute epi kontaminasyon ADN yo pa te retire. Se poutèt sa, CT a pi wo epi rezilta a pa egzat; "+" endike ke yo te ajoute DNase ak kontaminasyon ADN yo te retire, rezilta a se egzat)

Chak amelyorasyon teknik vle di ke operasyon an nan eksperyans la ap devlope nan yon direksyon ki pi senp ak plis zanmitay itilizatè.

Foregene gen pou objaktif pou ede chèchè plis syantifik ekonomize tan eksperimantal ak pri, jwenn bon jan kalite rezilta eksperimantal, ak ansanm kreye reyalizasyon rechèch syantifik ki gen plis valè.