Otè: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Inite: Lopital Jiaozhou, Lopital Dongfang ki afilye ak Inivèsite Tongji

Kounye a, kalite echantiyon prensipal la pou deteksyon asid nukleik patojèn respiratwa se prelèvman nan gòj.Gen plizyè kalite solisyon prezèvasyon echantiyon yo itilize souvan, yo tout bezwen frijidè oswa jele pou transpò ak depo;Li difisil pou kontwole tout pwosesis la nan tanperati ki ba pandan koleksyon an ak pwosesis transpò, epi li difisil pou asire kontwòl kalite a anvan tès echantiyon.^[1-2].

RNase (RNase) se yon andonukleaz ki idrolize RNA, sitou koupe lyezon fosfodiestè ant nukleotid.Molekil RNase a trè estab, gen lyezon disulfid nan estrikti a, ak aktivite li yo pa mande pou prezans nan kasyon divalan, kidonk RNase pa fasil denatire, epi li fasil pou renature menm apre tanperati ki wo oswa itilize nan denaturant.RNases yo divize an andojèn ak ekzojèn.RNases andojèn yo ka lage an menm tan lè selil yo kraze.Se poutèt sa, elimine wòl nan RNases andojèn se yon etap trè kritik nan pwosesis la ekstraksyon RNA.RNases exogenous yo lajman distribiye.RNases egziste nan lè a, po moun, cheve ak saliv, ki se rezon enpòtan pou degradasyon fasil nan RNA.^[3].

Rekèt done

CANS-CL02-A009 "Aplikasyon pou bon jan kalite laboratwa medikal ak Gid akreditasyon konpetans nan jaden an nan dyagnostik molekilè" nan kondisyon teknik yo pwopoze ke estanda kalite dlo apwopriye yo ta dwe fòmile dapre aplikasyon an;Kontenè ki byen fèmen jetab:

RNase/Klasifikasyon

(1) RNaz A

Ribonukleaz A (RNase A), ki sòti nan pankreyas bovin, se yon andoribonukleaz ki ka espesyalman atake fen 3′ nan résidus pirimidin sou RNA, koupe cytosine oswa uracil ki fòme pa nukleotid adjasan.Kosyon fosfodiestè, pwodwi final reyaksyon an se yon nukleotid pirimidin 3′ ak yon oligonukleotid ak yon nukleotid pirimidin 3′ nan fen.

(2) RNaz T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) sòti nan Aspergillus orjzae, li espesyalman aji sou fosfat nan 3′-tèminal nan guanine, ak sit la klivaj se ant fosfat nan 3′ nan guanine ak 5′ idroksil la nan nukleotid adjasan.Pwodwi final la nan reyaksyon an se 3'guanylic asid ak fragman oligonukleotid ak 3'guanylic asid nan fen an.

(3) RNaz H

Ribonukleaz H (RNase H) te premye dekouvri nan tisi timis ti towo bèf, e li te klonaj jèn kodaj li nan Escherichia coli.Li ka espesyalman degrade ADN: seksyon RNA nan duplex ibrid RNA, sa ki lakòz oligonukleotid ak mononukleotid ak pwent 3′-OH ak 5′-monofosfat, li pa ka degrade ADN oswa RNA sèl oswa doub.

RNase

Fonksyon ak itilizasyon

Ribonukleaz ka katalize degradasyon asid ribonukleik (RNA) epi yo ka sentèz atifisyèlman.Odè medikaman yo itilize lokalman pou trete chòk ak doulè nan jwenti.Dapre rapò, ribonukleaz ka chanje metabolis selil lame, anpeche sentèz viris, anpeche pwopagasyon viris grip an vitro, ak anpeche fòmasyon vaksin ak viris èpès nan anbriyon poul.Itilizasyon klinik ribonukleaz chak jou nan miskilè piki 180 mg, benefisye nan tretman ansefalit epidemi, ribonukleaz ka katalize degradasyon asid ribonukleik (RNA), epi kounye a ka atifisyèlman sentèz.Odè medikaman yo itilize lokalman pou trete chòk ak doulè nan jwenti.Dapre rapò, ribonukleaz ka chanje metabolis selil lame, anpeche sentèz viris, anpeche pwopagasyon viris grip an vitro, ak anpeche fòmasyon vaksin ak viris èpès nan anbriyon poul.Itilizasyon klinik ribonukleaz chak jou nan miskilè piki 180 mg se benefisye pou tretman ansefalit epidemi.

RNase

Definisyon Inibitè

Definisyon inite inibitè RNase: Kantite anzim ki nesesè pou anpeche 50% aktivite 5ng RNase A se yon inite.

Ki jan RNase Inhibiteurs travay

Gwanidin izotiosyanat:

Guanidine isothiocyanate se yon konpoze òganik ak fòmil molekilè C2H6N4S.Sitou itilize nan medikaman byolojik, reyaktif chimik, elatriye Guanidine isothiocyanate se yon ajan lysing pwoteyin, epi li se souvan itilize kòm eleman prensipal nan solisyon liz nan reyaktif dyagnostik molekilè.Li ka lyse tisi, detwi estrikti selilè ak disoye asid nikleyik soti nan nukleoprotein, epi li gen denaturasyon fò nan RNase.Li se inibitè RNase ki pi efikas kounye a.

TRIzol se yon nouvo reyaktif ekstraksyon total RNA ki ka dirèkteman ekstrè total RNA soti nan selil oswa tisi.Li gen sibstans ki sou tankou fenol ak guanidine isothiocyanate, ki ka rapidman deranje selil yo ak anpeche nukleaz ki lage pa selil yo.

(Sepandan, isothiocyanate guanidine a danjere pou sante chèchè laboratwa yo.)

RNasin:

Glikoprotein asid ekstrè nan fwa rat oswa blastoderm imen.Rnasin se yon inibitè ki pa konpetitif nan RNase, ki ka mare nan divès RNases pou inaktive yo.

(Plis detay: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Htanperati wo:

Tanperati wo se tou yon mwayen komen nan denaturasyon pwoteyin.

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

DEPC se yon inibitè RNase fò men enkonplè, ki ka anpeche aktivite RNase lè li konbine avèk bag imidazol asid amine nan gwoup aktif RNase pou denatire pwoteyin yo.

Vanadyl ribonukleozid konplèks:

Yon konplèks ki fòme pa iyon oksid vanadyòm ak nukleozid, ki mare ak RNase nan fòm sibstans tranzisyon, ki ka prèske konplètman anpeche aktivite RNase.

lòt:

SDS, ure, latè dyatom, elatriye tou gen yon sèten efè inhibition sou RNase.

Revizyon ekspè

Li Yujie Chèf Teknisyen

Direktè Depatman Laboratwa, Lopital Jiaozhou, Lopital Dongfang ki afilye ak Inivèsite Tongji

Yo nan lòd yo anpeche byodegradasyon nan RNase ekzojèn, mask, gan ak chapo yo ta dwe mete ak ranplase souvan pandan pwosesis la ekstraksyon RNA.Tout veso yo dwe kwit nan yon fou siye nan 200 ° C pou plis pase 2 èdtan.Materyèl yo itilize pou boulanjri, tankou plastik, bezwen trete ak dlo DEPC, ak Lè sa a, lave ak dlo distile.Reyaktif yo oswa aparèy yo itilize pou fè ekstraksyon, prezèvasyon ak idantifikasyon RNA yo ta dwe dedye a RNA, epi yo ta dwe mete yon zòn operasyon endepandan RNA.

referans:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Bakteri ak viris nan nasopharynx la imedyatman anvan aparisyon enfeksyon egi nan respiratwa pi ba nan timoun endijèn Ostralyen [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Branch Kontwòl Enfeksyon Lopital nan Asosyasyon Medikaman Prevantif Chinwa.Gid pou koleksyon ak enspeksyon espesimèn mikwòb klinik [J].Chinese Journal of Hospital Infection, 2018 (20): 3192-3200.

[3] "Tès klinik dis mil Poukisa volim tès byoloji molekilè"