Mwen kwè ke tout moun ap toujou rankontre pwoblèm sa yo oswa tankou lè yo fè reyaksyon PCR, men pifò nan yo ka klase nan de pwoblèm prensipal:

Anplifikasyon twò piti nan modèl jèn (anplifikasyon);
Twòp anplifikasyon jèn ki pa sib.
Sèvi ak aditif se youn nan estrateji komen yo rezoud pwoblèm sa yo.Anjeneral wòl aditif yo gen de aspè:
estrikti segondènan jèn (segondè estrikti);
Diminye priming ki pa espesifik.
Jodi a, editè a pral yon ti tan prezante aditif komen yo nan reyaksyon PCR ak fonksyon yo.
Aditif ki diminye estrikti segondè
sulfoksid(DMSO)
echantiyon jènak kontni GC segondè.Sepandan, DMSO tou redwi anpil aktivite polymerase Taq.Se poutèt sa, tout moun dwe balanse aksesibilite modèl la ak aktivite polymerase la.Editè a sijere ke ou ka eseye diferan konsantrasyon nan DSMO, tankou soti nan 2% a 10%, jwenn konsantrasyon an ki kostim eksperyans ou.
Detèjan ki pa iyonik
Detèjan ki pa iyonik, tankou 0.1-1% Triton X-100, Tween 20 oswa NP-40, anjeneral redwi estrikti segondè ADN.Malgre ke sa a ka ogmante anplifikasyon nan jèn modèl la, li pral lakòz tou pwoblèm nan anplifikasyon ki pa espesifik.Se konsa, aditif sa yo travay byen pou reyaksyon PCR ki ba-sede san debri, men se pa tèlman byen pou reyaksyon PRC relativman enpur.Yon lòt benefis detèjan ki pa iyonik se rediksyon kontaminasyon SDS.Anjeneral pandan pwosesis ekstraksyon ADN, SDS yo pral pote nan etap PCR la, ki anpil anpeche aktivite polymerase la.Se poutèt sa, ajoute 0.5% Tween-20 oswa Tween-40 nan reyaksyon an ka netralize efè negatif SDS.
Betaine_
Betaine ka amelyore anplifikasyon ADN nan diminye fòmasyon segondè estrikti epi jeneralman se yon adisyon "mistè" nan twous PCR komèsyal yo.Si ou vle sèvi ak betaine, ou ta dwe mete betaine oswa betaine mono-idrat (Betaine oswa Betaine mono-idrat), men pa betaine idroklorid (Betaine HCl), ajiste nan yon konsantrasyon final nan 1-1.7M.Betaine ka ede tou amelyore espesifik paske li elimine depandans konpozisyon pè baz ADN k ap fonn / denaturasyon ADN.
Aditif pou diminye priming ki pa espesifik
Formamid
Formamid se yon aditif PCR òganik ki souvan itilize.Li ka konbine avèk gwo Groove ak Minè Groove nan ADN, kidonk diminye estabilite nan mèt ADN doub helix la ak bese tanperati k ap fonn ADN.Konsantrasyon nan formamid yo itilize nan eksperyans PCR se nòmalman 1% -5%.
Tetramethylklori amonyòm( TMAC)
Klori tetramethylammonium ka ogmante espesifik ibridizasyon (espesifik ibridizasyon) ak ogmante tanperati k ap fonn ADN.Kidonk, TMAC ka retire priming ki pa espesifik epi redwi misbinding ADN ak RNA.Si w itilizepremye dejenerenan reyaksyon an PCR, sonje ajoute TMAC, ki se souvan itilize nan yon konsantrasyon nan 15-100mM.
Lòt aditif komen
Anplis de kategori aditif mansyone pi wo a, gen anpil aditif komen nan reyaksyon PCR, byenke yo gen fonksyon diferan, yo tou trè enpòtan.
Manyezyòm ion
Manyezyòm ion se yon kofaktè endispansab (kofaktè) nan polymerase, sa vle di, san yo pa ion mayezyòm, polymerase se inaktif.Sepandan, twòp iyon mayezyòm ka afekte efikasite polymerase la.Konsantrasyon iyon mayezyòm nan chak reyaksyon PCR ap varye.Ajan chelating (tankou EDTA oswa sitrat), konsantrasyon nan dNTPs ak pwoteyin tout afekte konsantrasyon nan iyon mayezyòm.Se konsa, si ou gen pwoblèm ak eksperyans PCR ou a, ou ka eseye chanje diferan konsantrasyon ion mayezyòm, pou egzanp, soti nan 1.0 a 4.0mM, ak yon entèval nan 0.5-1mM nan mitan.
Li enpòtan pou remake ke plizyè sik friz-dekonjle ka mennen nan stratifikasyon konsantrasyon nan solisyon an klori mayezyòm.Se poutèt sa, ou dwe fonn li konplètman anvan chak itilizasyon, epi melanje li byen anvan ou sèvi ak li.
Albumin serik bovin(Albumin bovin, BSA)
Nan eksperyans chimi molekilè, albumin serom bovin se yon aditif trè komen, espesyalman nan dijesyon anzim restriksyon ak eksperyans PCR.Nan reyaksyon PCR, BSA itil nan diminye kontaminan tankou konpoze fenolik.Epi li te di tou ke li ka diminye Adhesion nan reyaktif nan miray la nan tib tès la.Nan reyaksyon an PCR, anjeneral konsantrasyon nan BSA te ajoute ka rive nan 0.8 mg / ml.
 
Pwodwi ki gen rapò:
Ewo PCR(ak lank)
Ewo PCR