PCR dirèk se yon reyaksyon ki itilize dirèkteman tisi bèt oswa plant pou anplifikasyon san ekstraksyon asid nikleyik.Nan plizyè fason, PCR dirèk travay tankou PCR regilye

Diferans prensipal la se tanpon koutim yo itilize nan PCR dirèk, echantiyon an ka dirèkteman sibi reyaksyon PCR san ekstraksyon asid nikleyik, men gen kondisyon korespondan pou tolerans anzim yo ak konpatibilite tanpon ki enplike nan reyaksyon PCR dirèk.

Malgre ke gen plis oswa mwens inhibiteur PCR nan echantiyon komen, PCR dirèk ka toujou reyalize anplifikasyon serye anba aksyon an nan anzim ak tanpon.Reyaksyon PCR tradisyonèl la mande pou asid nikleyè kalite siperyè kòm yon modèl, ki ka anpeche pwogrè lis nan reyaksyon PCR si modèl la gen pwoteyin ak lòt enpurte.Direct PCR se kounye a youn nan teknoloji ki pi popilè nan domèn dyagnostik molekilè.

01 Direct PCR te orijinal itilize pou bèt ak plant

Aplikasyon an pi bonè nan PCR dirèk se nan jaden an nan bèt ak plant, tankou san an, tisi ak cheve nan rat la, chat, poul, lapen, mouton, bèf, elatriye, fèy plant ak grenn, elatriye, yo itilize pou etidye jenotip, transjenik, deteksyon plasmid, analiz Gene knockout, idantifikasyon sous ADN, analiz espès ak lòt idantifikasyon SNP.

Jaden sa yo gen kèk karakteristik komen, se sa ki, kontni an jèn sib se relativman wo ak ekstraksyon asid nikleyik se anbarasman, kidonk PCR dirèk pa ka sèlman ekonomize tan epi gen yon ti enpak sou rezilta yo, men tou, ekonomize pri.

Dirèk PCR yo itilize pou deteksyon patojèn se yon kesyon de dènye ane yo, kèk manifaktirè reyaktif PCR te fè anpil efò nan direksyon sa a lè yo fè inovasyon.Espesyalman nan epidemi COVID-19 sa a, anpil pwodwi deteksyon sa yo te parèt sou mache a, tankou SARS-CoV-2 Twous Deteksyon Asid Nukleik (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) rechèch ak devlope pa Foregene, ki sèvi ak an tan reyèl RT PCR teknoloji (rRT-PCR) pou deteksyon kalitatif nan echantiyon nasophange nan SARS-CoV-2 oswa echantiyon nasophange asid nasophange-2 imen. s.

Foregene se youn nan konpayi yo ki itilize Direct PCR teknoloji, pou deteksyon nòmal ORF1ab, N, E, ak.variant liyaj asid nikleyik nan echantiyon prelèvman nasopharyngeal oswa oropharyngeal imen tankou SARS-CoV-2 B.1.1.7 liyaj (UK), B.1.351 liyaj (ZA), B.1.617 liyaj (IND) ak P.1 liyaj (BR).

02  Reyaktif ki nesesè pou PCR dirèk

Egzanp Lysate

Lisate echantiyon an ka configuré pa tèt ou oswa achte.Diferans nan konpozisyon diferan mak nan lysate pral fè kapasite nan lysing diferan, ak Lè sa a, tan an lysing pral yon ti kras diferan.Pou egzanp, pou preparasyon echantiyon tisi bèt, 30 minit oswa lysis lannwit lan jeneralman rekòmande, ak solisyon an lysis pou viris varye ant 3-10 minit.

PCR mèt melanj

Li rekòmande pou itilize ADN polymerase cho-start pou amelyore anplifikasyon espesifik ak ogmante kapasite anplifikasyon.Nwayo a nan PCR dirèk se yon polymerase trè toleran.

Elimine oswa anpeche eleman nan echantiyon an ki afekte anplifikasyon ADN

Apre echantiyon an trete ak lysate la, pwoteyin, lipid ak lòt debri selil yo pral lage, sibstans sa yo pral anpeche reyaksyon PCR la.Se poutèt sa, PCR dirèk mande pou ajoute nan retire korespondan oswa inhibiteur diminye enfliyans nan faktè sa yo.

03  Yon koleksyon senk pwen konesans nan PCR dirèk

Premyèman, teknoloji PCR dirèk se yon teknoloji PCR dirèk pou divès echantiyon byolojik.Anba kondisyon teknik sa a, pa gen okenn nesesite separe ak ekstrè asid nikleyik la, dirèkteman sèvi ak echantiyon tisi a kòm objè a, epi ajoute primè jèn yo sib yo fè reyaksyon an PCR.

Dezyèmman, Direct PCR teknoloji se pa sèlman yon tradisyonèl ADN modèl anplifikasyon teknoloji, men tou gen ladann RNA modèl ranvèse transcription PCR.

Twazyèmman, Direct PCR teknoloji pa sèlman dirèkteman fè woutin kalitatif PCR reyaksyon sou echantiyon tisi, men tou gen ladan reyaksyon an tan reyèl qPCR, ki mande pou sistèm reyaksyon an gen gwo kapasite entèferans fluoresans anti-background ak endojèn fluoresans quenchers kapasite antagonis la.

Katriyèmman, echantiyon yo vize pa teknoloji PCR dirèk la sèlman bezwen lage modèl asid nikleyik, epi yo pa retire pwoteyin, polisakarid, iyon sèl, elatriye ki entèfere ak reyaksyon PCR la.Ki mande pou polymerase asid nikleyè ak PCR Mix nan sistèm reyaksyon an gen ekselan rezistans ak adaptabilite pou asire aktivite anzim ak presizyon replikasyon nan kondisyon konplèks.

Senkyèm, echantiyon an tisi vize pa teknoloji PCR dirèk san okenn tretman anrichisman asid nikleyè ak kantite modèl la piti anpil, ki mande pou sistèm reyaksyon an gen sansiblite trè wo ak efikasite anplifikasyon.