Karakteristik eksepsyonèl reyaksyon PCR la se gwo kapasite anplifikasyon li yo ak sansiblite trè wo.Yo nan lòd yo amelyore pèfòmans PCR ak efikasite deteksyon, nou angaje nan amelyore kapasite anplifikasyon PCR ak sansiblite deteksyon, men maltèt la se nan pwosesis la nan eksperyans la.Fo pozitif souvan rive, ak yon ti kantite echantiyon kwa-kontaminasyon oswa kontaminasyon pwodwi PCR ka lakòz fo pozitif nan eksperyans la.
Senk kalite kontaminasyon pwodwi PCR
Gen anpil rezon pou kontaminasyon PCR, ki ka apeprè divize an kategori sa yo:
Kontaminasyon espesimèn se sitou ki te koze pa kontaminasyon nan veso a pou kolekte echantiyon an, oswa lè yo mete echantiyon an, li koule soti nan veso a akòz sele ki lach, oswa echantiyon an respekte deyò a nan veso a, ki lakòz kontaminasyon kwa;Kontaminasyon mennen nan kontaminasyon ant espesimèn;kèk espesimèn mikwòb, espesyalman viris, ka gaye ak ayewosòl oswa fòme ayewosòl, sa ki lakòz kontaminasyon mityèl.
Rezon prensipal ki fè se ke pandan preparasyon an nan reyaktif PCR, zam echantiyon an, veso, doub dlo distile ak lòt solisyon yo kontamine pa modèl la PCR asid nikleyik.
Nan laboratwa byoloji molekilè ak kèk laboratwa ki sèvi ak plasmid klone kòm kontwòl pozitif, pwoblèm nan kontaminasyon plasmid klone tou komen.Paske kontni an nan plasmid klonaj nan volim inite se byen wo, ak plis zouti ak reyaktif yo bezwen nan pwosesis la pou pirifye, ak plasmid la nan selil k ap viv gen anpil chans yo dwe kontamine akòz kwasans lan fò ak kapasite repwodiksyon nan selil k ap viv.
Kontaminasyon an nan pwodwi anplifye se pwoblèm ki pi komen nan kontaminasyon nan reyaksyon PCR.Paske kantite kopi pwodwi PCR la gwo (jeneralman 1013 kopi/ml), ki se byen lwen pi wo pase limit nimewo kopi deteksyon PCR, yon ti kantite kontaminasyon pwodwi PCR ka lakòz fo pozitif.
Polisyon ayewosòl se fòm ki gen plis chans nan kontaminasyon nan pwodwi PCR, epi li se tou pi fasil yo dwe neglije.Li fòme pa friksyon ki genyen ant sifas likid la ak lè a.Anjeneral, kontaminasyon aerosol ka fòme lè kouvèti a louvri, lè echantiyon an aspire, oswa menm lè tib reyaksyon an souke kouray.Dapre kalkil, yon patikil ayewosòl ka genyen 48,000 kopi, kidonk polisyon ki te koze pa li a se yon pwoblèm ki merite atansyon espesyal.
An patikilye, laboratwa tès yo souvan itilize menm pè primè pou teste yon jèn sèten.Apre yon tan, yon gwo kantite kontaminasyon pwodwi PCR pral rive nan espas laboratwa a.Yon fwa kontaminasyon sa yo rive, li difisil pou elimine li nan yon ti tan.
Pou twa premye kalite polisyon, nou ka itilize mwayen efikas pou fè pou evite, men polisyon ki te koze pa pwodwi PCR difisil pou anpeche, espesyalman nan konstriksyon laboratwa PCR ki pa estanda.Nan pwosesis PCR la, lè pwent pipèt la souse ak soufle likid la, epi kouvèti tib PCR la louvri, yo pral fòme yon aerosol.Molekil ADN yo pote nan aerosol la (yon sèl aerosol ka pote dè dizèn de milye ADN) difisil pou elimine paske yo flote nan lè a.Yon fwa yo prezante pwochen wonn nan eksperyans PCR, fo pozitif pral inevitableman rive.
Jan yo montre nan figi ki anba a, kontwòl negatif la tou anplifye gwoup enterè ki koresponn lan:
Premye pati nan pwoblèm sa a nan polisyon ak prevansyon PCR prezante isit la.Pwochen pwoblèm nan pral pote ou dezyèm pati "Prevansyon kontaminasyon pwodwi PCR", kidonk rete branche!
Tan pòs: 25 jiyè 2017
