Etabli SOP eksperyans PCR pou estandadize konpòtman pèsonèl eksperyans.
Eksperimantè a estrikteman respekte pwosedi fonksyònman yo, epi minimize polisyon an PCR ki ka koze pa faktè imen oswa anpeche ensidan an nan polisyon.Anplis de sa, eksperimantè a ta dwe gen konesans ak ladrès pwofesyonèl ki koresponn lan, ki gen ladan konpetans nan opere ekipman ki gen rapò, klarifye tout pwosesis travay la, metrize metòd tretman kontaminasyon ak metòd kontwòl kalite laboratwa, epi yo te kapab kòrèkteman entèprete rezilta tès yo.
Etabli yon laboratwa PCR estanda.
Laboratwa PCR divize an kat zòn nan prensip, sètadi zòn preparasyon reyaktif, zòn pwosesis echantiyon, zòn anplifikasyon, ak zòn analiz pwodwi anplifikasyon.De premye zòn yo se zòn pre-anplifikasyon, ak de dènye zòn yo se zòn pòs-anplifikasyon.Zòn pre-anplifikasyon ak zòn pòs-anplifikasyon yo ta dwe entèdi separe.Materyèl eksperimantal, reyaktif, papye anrejistreman, plim, materyèl netwayaj, elatriye, ka sèlman koule soti nan zòn nan pre-anplifikasyon nan zòn nan apre-anplifikasyon, se sa ki, soti nan zòn preparasyon reyaktif → zòn pwosesis echantiyon → zòn anplifikasyon → zòn analiz pwodwi anplifikasyon, epi yo pa dwe koule bak .Airflow nan laboratwa a ta dwe tou koule soti nan zòn nan pre-anplifikasyon nan zòn nan apre-anplifikasyon, epi yo pa koule bak.Yo montre konsepsyon ideyal laboratwa PCR la anba a:
Figi A: Ideyal PCR mòd konfigirasyon laboratwa ak presyon negatif nan sal tanpon an
Figi B: Ideyal PCR mòd konfigirasyon laboratwa ak presyon pozitif nan chanm tanpon an
Dyagram konfigirasyon laboratwa PCR yo bay nan Figi A ak Figi B yo ta dwe yon mòd konfigirasyon pi ideyal, ak laboratwa a ki gen kondisyon yo ka refere a mòd sa a pou konsepsyon.Pou laboratwa òdinè, li rekòmande pou zòn anplifikasyon PCR la ak zòn analiz pwodwi a ka separe, epi ouvèti kouvèti a ta dwe redwi otank posib nan zòn preparasyon echantiyon an ak zòn anplifikasyon PCR la.Sonje byen: Pwodwi ak founiti eksperimantal nan zòn analiz pwodwi yo entèdi entèdi pou yo mennen l nan zòn preparasyon echantiyon an ak zòn anplifikasyon PCR la.
Si laboratwa a sèlman fè deteksyon ak idantifikasyon PCR, li rekòmande pou itilize fluoresan PCR quantitative olye de PCR konvansyonèl yo.
Fluoresans quantitative PCR rezilta deteksyon yo ka kolekte epi analize pa siyal fliyoresan, kidonk pa gen okenn bezwen louvri kouvèti a pou elektwoforèz apre reyaksyon an, ki evite kontaminasyon an pwodwi PCR ki te koze pa flit nan pwodwi reyaksyon yo fòme ayewosòl.Si ou ogmante kantite ouvèti bouchon yo pandan etap chaj elektwoforèz jèl, kontaminasyon aerosol gen anpil chans rive.Li rekòmande pou ankouraje aplikasyon quantitative PCR ak piti piti ranplase qualitative PCR.
Yo itilize sistèm kontaminasyon pwodwi UNG anti-PCR pou reyaksyon PCR la.
Sistèm nan itilize dUTP olye de dTTP.Apre reyaksyon PCR la, tout pwodwi PCR (fragman ADN) yo enkòpore ak dUTP;nan pwochen wonn nan reyaksyon PCR, anzim UNG ajoute nan sistèm nan enkube nan 37 ° C pou 5 minit anvan PCR, ki ka espesyalman degrade tout fragman ADN ki gen dUTP, ak Lè sa a, fè reyaksyon PCR.Sa a ka konplètman retire kontaminasyon ayewosòl ki te koze pa pwodwi PCR.Efè a montre nan figi ki anba a:
Remak: Pou seri PCR dirèk la, ou ka chwazi pwodwi seri nan sistèm kontaminasyon pwodwi anti-PCR Foregene.Sijere
Pou laboratwa ki fè tès jenotip a gwo echèl, li rekòmande pou itilize sistèm kontaminasyon pwodwi UNG anti-PCR pou fè tès reyaktif anplis konstriksyon laboratwa rezonab.
Rapèl: Itilizasyon sistèm sa a pa ka retire kontaminasyon pwodwi PCR ki te deja koze a.Se poutèt sa, yo ta dwe itilize sistèm UNG nan kòmansman tès ki enpòtan an, epi sistèm UNG yo ta dwe itilize pou anplifikasyon PCR, pou anpeche kontaminasyon pwodwi PCR fo pozitif.
Li rekòmande pou itilize sistèm Direct PCR-UNG Foregene lè w ap fè tès gwo echèl, tankou:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG;
Animal Tissus Direct PCR Kit-UNG;
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Seri sa a nan twous soti nan Foregeneka pa sèlman fè deteksyon PCR byen vit ak sou yon gwo echèl, men tou, efektivman anpeche ak kontwole kontaminasyon pwodwi PCR.
Tan poste: Mar-19-2021
