Pèt tande (HL) se maladi andikap sansoryèl ki pi komen nan moun.Nan peyi devlope yo, apeprè 80% nan ka soud prelingual nan timoun yo ki te koze pa faktè jenetik.Ki pi komen yo se domaj sèl-jèn (jan yo montre nan Fig. 1), 124 mitasyon jèn yo te jwenn yo dwe asosye ak pèt tande nonsyndromic nan imen, rès la yo ki te koze pa faktè anviwònman an.Yon implant kokleyè (yon aparèy elektwonik ki mete nan zòrèy enteryè a ki bay eksitasyon elektrik dirèkteman nan nè oditif la) se byen lwen opsyon ki pi efikas pou trete HL grav, pandan y ap yon aparèy oditif (yon aparèy elektwonik ekstèn ki konvèti ak anplifye ond son) ka ede Pasyan ki gen HL modere.Sepandan, kounye a pa gen okenn medikaman ki disponib pou trete HL ereditè (GHL).Nan dènye ane yo, terapi jèn te resevwa ogmante atansyon kòm yon apwòch pwomèt pou trete malfonksyònman zòrèy enteryè.
Fig1.Distribisyon kalite varyasyon ki asosye ak soud.[1]
Dènyèman, syantis ki soti nan Enstiti Salk ak University of Sheffield te pibliye yon rezilta rechèch nan Terapi Molekilè - Metòd & Devlopman Klinik [2], ki te montre kandida aplikasyon laj pou terapi jèn in vivo nan soud éréditèr.Uri Manor, pwofesè rechèch asistan nan Salk Institute ak direktè Waitt Center for Advanced Biophotonics, te di ke li te fèt ak gwo pèt tande epi li te santi ke retabli tande ta yon bèl kado.Rechèch anvan li te jwenn ke Eps8 se yon pwoteyin regilasyon aktin ak aktivite obligatwa ak capping;nan selil cheve kokleyè, konplèks pwoteyin ki te fòme pa Eps8 ak MYO15A, WHIRLIN, GPSM2 ak GNAI3 sitou egziste nan pi fò Konsèy yo nan stereocilia long, ki ansanm ak MYO15A lokalize BAIAP2L2 nan pwent yo nan pi kout stereocilia, yo nesesè pou antretyen an nan pakèt cheve.Se poutèt sa, Eps8 ka kontwole longè stereocilia nan selil cheve, ki esansyèl pou fonksyon odyans nòmal;Sipresyon Eps8 oswa mitasyon ap mennen nan stereocilia kout, ki fè li pa kapab byen konvèti son nan siyal elektrik pou pèsepsyon nan sèvo, ki an vire mennen nan soud..An menm tan an, kolaboratè Walter Marcotti, yon pwofesè nan University of Sheffield, te jwenn ke selil cheve yo pa ka devlope nòmalman nan absans Eps8.Nan etid sa a, Manor ak Marcotti te mete tèt ansanm pou envestige si ajoute Eps8 nan selil estereyosilyè yo ta ka retabli fonksyon yo epi, an vire, amelyore tande nan sourit yo.Ekip rechèch la te itilize vektè adeno-asosye viris (AAV) Anc80L65 pou delivre sekans kodaj ki gen EPS8 sovaj nan kokle sourit P1-P2 ki fenk fèt Eps8-/- pa piki manbràn fenèt wonn;nan selil cheve kokleyè sourit yo te repare fonksyon stereocilia anvan yo te gen matirite;ak efè reparasyon an te karakterize pa teknoloji D ak mezi stereocilia.Rezilta yo te montre ke Eps8 ogmante longè stereocilia ak retabli fonksyon selil cheve nan selil frekans ba yo.Yo te jwenn tou ke, apre yon sèten tan, selil yo te sanble pèdi kapasite yo pou yo sove pa terapi jèn sa a.Enplikasyon an se ke tretman sa a ka bezwen yo dwe administre nan matris, kòm Eps8-/- selil cheve yo ka gen matirite oswa akimile domaj pi lwen pase reparasyon apre sourit yo te fèt."Eps8 se yon pwoteyin ki gen anpil fonksyon diferan, e gen toujou anpil pou eksplore," Manor te di.Rechèch nan lavni pral gen ladan envestigasyon efè terapi jèn Eps8 nan retabli odyans nan diferan etap devlopman, epi si li ka posib pou pwolonje opòtinite tretman.Azar, nan Novanm 2020, Pwofesè KarenB Avraham nan Inivèsite Tel Aviv nan peyi Izrayèl la te pibliye rezilta li yo nan jounal EMBO Molecular Medicine [3], lè l sèvi avèk yon teknoloji inovatè terapi jèn pou kreye yon viris adeno-asosye sentetik inofansif AAV9-PHP.B, Yo te repare defo jèn nan selil cheve Syne4-/- sourit yo lè yo enjekte yon viris ki pote sekans kodaj Syne4 nan zòrèy enteryè sourit, sa ki pèmèt li antre nan selil cheve yo epi lage materyèl jenetik ki te pote a, sa ki pèmèt yo matirite ak fonksyone nòmalman (tankou nan Fig. 2).
Fig2.Reprezantasyon chematik nan anatomi zòrèy enteryè, ak yon konsantre sou ògàn Corti ak fonksyon selilè nesprin-4.
Li ka wè ke itilizasyon terapi jèn pou reyalize objektif trete maladi éréditèr nan nivo jèn nan mete, retire oswa korije nenpòt jèn mitasyon pou tretman (ki se, kontwole chanjman jenetik nan maladi a) gen yon gwo efè klinik.kandida aplikasyon yo.Metòd terapi jèn aktyèl yo pou soud jenetikman defisyan yo ka divize an kategori sa yo:
ranplasman jèn
Ranplasman jèn se san mank fòm ki pi "dwat" nan terapi jèn, ki baze sou idantifye ak ranplase yon jèn ki defektye ak yon kopi nòmal oswa sovaj nan jèn nan.Premye etid terapi jèn zòrèy enteryè ki gen siksè pou pèt tande ki te koze pa efase jèn vesicular glutamate transporter 3 (VGLUT3) la;AAV1-medyatè livrezon ekspresyon VGLUT3 ekzojèn nan selil cheve anndan zòrèy (IHCs) Kapab lakòz rekiperasyon odyans soutni, rekiperasyon pasyèl mòfoloji sinaptik riban, ak repons konvulsif [4].Sepandan, nan egzanp yo ki gen ladan de ranplasman jèn AAV-livre ki dekri nan entwodiksyon ki pi wo a, li enpòtan sonje ke modèl sourit yo itilize pou sèten kalite epresyon jèn twoub pèt tande éréditèr tanporèman diferan de moun, ak nan sourit P1, zòrèy enteryè a se nan etap matirite nan devlopman.Kontrèman, moun yo fèt ak yon zòrèy enteryè ki gen matirite.Diferans sa a anpeche posib aplikasyon rezilta sourit yo nan tretman maladi moun soud éréditèr sof si terapi jèn yo lage nan zòrèy sourit ki gen matirite.
Gen koreksyon: CRISPR/Cas9
Konpare ak "ranplasman jèn", devlopman nan teknoloji koreksyon jèn te pote dimanch maten byen bonè nan trete maladi jenetik soti nan rasin lan.Sa ki enpòtan, metòd la koreksyon jèn fè moute pou enpèfeksyon yo nan metòd terapi jèn tradisyonèl overexpression ki pa apwopriye pou maladi dominan éréditè soud, ak pwoblèm nan ki metòd la overexpression pa dire lontan.Apre chèchè Chinwa yo espesyalman te frape Myo6C442Y alèl mutan nan sourit Myo6WT/C442Y lè l sèvi avèk sistèm koreksyon jèn AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2, ak nan lespas 5 mwa apre knockout la, sourit Fonksyon oditif modèl la te retabli;an menm tan an, li te tou obsève ke pousantaj siviv nan selil cheve nan zòrèy enteryè a te amelyore, fòm nan sily yo te vin regilye, ak endikatè elektwofizyolojik yo te korije [5].Sa a se premye etid nan mond lan ki sèvi ak teknoloji CRISPR/Cas9 pou tretman soud éréditèr ki te koze pa mitasyon jèn Myo6, epi li se yon pwogrè rechèch enpòtan nan teknoloji koreksyon jèn pou tretman soud éréditèr.Tradiksyon klinik tretman an bay yon baz syantifik solid.
Metòd livrezon terapi jèn
Nan lòd pou terapi jèn yo gen siksè, molekil ADN toutouni pa ka penetre selil yo efektivman akòz idrofilisite yo ak chaj negatif nan gwoup fosfat, epi asire entegrite nan molekil yo asid nikleyè siplemantè, yo dwe chwazi yon metòd san danje epi efikas.ADN siplemantè a delivre nan selil la sib oswa tisi.AAV se lajman itilize kòm yon machin livrezon pou tretman maladi akòz gwo efè enfektye li yo, iminojenisite ki ba, ak gwo tropism nan divès kalite tisi.Kounye a, yon gwo kò rechèch te detèmine tropism nan diferan subtip AAV parapò ak diferan kalite selil nan kokle sourit la.Sèvi ak karakteristik livrezon AAV konbine avèk pwomotè selil espesifik ka reyalize ekspresyon selil espesifik, sa ki ka diminye efè off-sib.Anplis de sa, kòm yon altènativ a vektè AAV tradisyonèl yo, nouvo vektè AAV sentetik yo toujou ap devlope epi montre kapasite transdiksyon siperyè nan zòrèy enteryè a, nan ki AAV2 / Anc80L65 se pi lajman itilize.Metòd livrezon ki pa viral yo ka plis divize an metòd fizik (mikwo-enjeksyon ak elektwoporasyon) ak metòd chimik (ki baze sou lipid, ki baze sou polymère, ak nanopartikil lò).Tou de apwòch yo te itilize nan tretman maladi soud éréditèr epi yo te montre avantaj ak limit diferan.Anplis de veyikil livrezon pou terapi jèn kòm yon machin, yo ka itilize diferan apwòch pou administrasyon jèn in vivo ki baze sou diferan kalite selil sib, wout administrasyon, ak efikasite terapetik.Estrikti konplike nan zòrèy enteryè a fè li difisil pou rive jwenn selil sib yo ak distribisyon ajan koreksyon genòm yo ralanti.Labirent manbràn nan sitiye nan labirent zo tanporèl la epi li gen ladan kanal kokleyè a, kanal semi-sikilè, utricle ak balon.Izolasyon relatif li yo, sikilasyon lenfatik minimòm, ak separasyon ak san an pa yon baryè labirent san limite livrezon efikas sistemik nan terapetik pou sourit neonatal sèlman.Pou jwenn tit viral ki apwopriye pou terapi jèn, li nesesè piki lokal dirèk nan vektè viral nan zòrèy enteryè a.Wout piki etabli yo enkli [6]: (1) manbràn fenèt wonn (RWM), (2) tracheostomi, (3) kokleostomi andolinfatik oswa perilfatik, (4) manbràn fenèt wonn plis fenestrasyon tib (CF) (tankou nan Fig. 3).
Fig3.Livrezon zòrèy enteryè nan terapi jèn.
Malgre ke anpil pwogrè yo te fè nan terapi jèn, ki baze sou objektif tradiksyon klinik, plis travay bezwen fè anvan terapi jèn ka vin yon opsyon tretman premye liy pou pasyan ki gen maladi jenetik, espesyalman nan devlopman nan vektè ki an sekirite ak efikas ak metòd livrezon.Men, nou kwè ke nan fiti prè, kalite tretman sa yo pral vin yon eleman prensipal nan terapi pèsonalize epi yo pral gen yon enpak trè pozitif sou lavi moun ki gen maladi jenetik ak fanmi yo.
Foregene te lanse tou yon twous tès depistaj wo-debi pou jèn vize, ki se rapid epi ki ka fè transkripsyon ranvèse ak reyaksyon qPCR san ekstraksyon RNA.
Lyen pwodwi
Twous Cell Direct RT-qPCR—Taqman/SYBR GREEN I
Pou plis enfòmasyon sou pwodwi, tanpri kontakte:
Lè poste: 02-Sep 2022
