Konbyen ou konnen

Konsènan Nekstraksyon asid ukleik

Kòmansman ak fen asid nikleyik pirifye

Tout bagay se difisil nan kòmansman an, pirifye asid nikleyik se pi plis la

Inisyasyon nan eksperyans molekilè, pou eksperyans ki vin apre

Siksè oswa echèk gen yon enpak enpòtan.

Trace/ultra-trace UV spectrophotometer se favorize pa anpil chèchè syantifik paske li ka detekte konsantrasyon asid nikleyè ak pwoteyin ak rezidi iyon sèl tou senpleman, byen vit ak ekonomikman.

Kòm nou tout konnen, A260 vle di valè OD absòbe asid nikleik, A280 vle di valè absòbe OD konsantrasyon pwoteyin, A230 vle di valè konsantrasyon sèl konsantrasyon OD, kidonk A260 ka konvèti konsantrasyon asid nikleyik, A260/280 vle di rezidi pwoteyin, A260/230 vle di rezidi ion sèl, men sa a se jis yon rezilta rechèch ki baze sou yon règ.konvansyonèl yo” kwè ke li ka eksplike pite nan ADN ak RNA ayon sèten limit.Li se pa estanda a sèlman pou idantifikasyon pwodiksyon asid nikleyik ak pite, li se sèlman itilize kòm yon referans, epi li se pa yon "estanda lò".

Manyèl Thermo Fisher ND-2000 la mete aksan sou fyab rezilta tès yo

Rezon ki fè la se ke rezilta yo jwenn lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt mikwo / ultramicro UV sèlman reflete sede a ak pite nan asid nikleyik soti nan bò a, e gen anpil faktè enfliyanman (chemen optik, volim echantiyon, konsantrasyon echantiyon, valè pH, lòt iyon ki afekte mezi absorpsyon, elatriye), valè OD mezire pa nesesèman egzat.An menm tan an, akòz mank de espesifik nan materyèl la detèminasyon valè absorption, ADN sèl-bloke, ADN doub-bloke, RNA, dNTPs, ak kèk pwoteyin tout gen pik absòpsyon nan longèdonn 260nm, ak konsantrasyon an detèmine pa A260 pou kont li se pa nesesèman ADN reyèl la oswa RNA.Konsantrasyon, ak entegrite li ak degradasyon pa ka jije.

Se konsa, ki jan yo jije bon jan kalite a nan asid nikleyik pirifye nou an?Anplis de sa nan sèvi ak yon espektrofotomèt mikwo / ultramicro UV pou deteksyon, metòd tankou elektwoforèz jèl agarose yo oblije tou pou montre vizyèlman pite ak entegrite asid nikleyik la, epi endike konsantrasyon an nan yon sèten limit.Nan fason sa a, pwodiksyon asid nikleyik ak pite yo jwenn nan rezilta deteksyon divès metòd yo kredib.

Konparezon tablo eksperimantal

ADN jenomik nan selil H1299 yo te ekstrè lè l sèvi avèk twous ADN Ekstraksyon konpayi A a, epi yo te wè siyifikatif kontaminasyon enpurte, sa ki lakòz gwo valè OD.

(Valè mezi OD ak elektwoferogram korespondan)

Endèks evalyasyon

Èske gen yon "estanda lò" pou pwodiksyon asid nikleyik ak tès kalite?

Osi lwen ke nou konnen, pa gen okenn metòd senp, rapid ak bon mache.Kit se espektrofotomèt, elektwoforèz jèl, oswa espektrometri mas, yo tout reflete konsantrasyon ak pite asid nikleyik nan solisyon an soti nan diferan aspè, epi yo bezwen jije pa youn refere ak lòt.

Pi bon endèks evalyasyon se toujouaplikasyon eksperimantal swivi a.Li pa afekte efikasite transkripsyon ranvèse ak anplifikasyon PCR.Jwenn pwodwi anplifikasyon serye ak valè Ct, ak jwenn yon sekans konplè pa sekans se ekstraksyon asid nikleyik siksè.

Pou rezime, gade nan teyori rapò-sèlman yo ta dwe defye pa gade nan "itilize bon rezilta eksperimantal en kòm bon paramèt ekstraksyon"!

Rekòmande Foregene DNA RNA twous ekstraksyon pou jwenn gwo pite ADN/RNA:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/