Dènyèman, mwen dekouvri yon bagay etonan!Anpil pwofesyonèl eksperyans avanse bò kote l 'pa menm konnen kèk pwen konesans trè debaz eksperimantal.

Pa egzanp, èske w ka reponn kesyon sa yo?

Èske gen yon diferans ant OD260 ak A260?Ki sa chak vle di?
OD se abrevyasyon nan dansite optik (dansite optik), A se abrevyasyon nan absorpsyon (absorbans), de konsèp yo se aktyèlman menm bagay la, "dansite optik" se "absorbans", men "dansite optik" se nan liy ak pifò estanda nasyonal ak plis estanda.

Anjeneral nou mezire valè OD a nan 260nm pou kalkile konsantrasyon asid nikleyik, kidonk kisa 1OD reprezante?
Asid nikleik gen yon pik absòpsyon maksimòm nan yon longèdonn 260nm, ki gen tou de ADN ak RNA, osi byen ke fragman asid nikleyè fragman (sa a se pwen kle).
Valè OD mezire nan yon longèdonn 260 nm te anrejistre kòm OD260.Si echantiyon an pi bon kalite, valè OD260 la ka kalkile konsantrasyon echantiyon asid nikleyik la.
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (ADN doub-chèn)
= 37 μg/ml ssDNA (ADN yon sèl-brin)
= 40 μg/ml RNA
= 30 μg/ml dNTPs (oligonukleotid)
Èske gen nenpòt koneksyon ak diferans ant RT-PCR, Realtime-PCR ak QPCR?
RT-PCR la vle di Reverse Transcription PCR
Real Time PCR = qPCR, kout pou Quantitative Real Time PCR
Malgre ke Real Time PCR (an tan reyèl fluorescent quantitative PCR) ak Reverse Transcription PCR (reverse transcription PCR) tou de sanble yo dwe abreje kòm RT-PCR.Men, konvansyon entènasyonal la se: RT-PCR espesyalman refere a PCR ranvèse transcription.

Ki nt, bp, ak kb yo souvan itilize pou dekri longè ADN/RNA nan byoloji?
nt = nukleotid
bp = pè baz pè baz
kb = kilobaz

Natirèlman, ou ta di ke anpil moun pa okipe ti detay sa yo!Tout moun fè sa, e pesonn p'ap mande w sa li ye.Ou konnen sa a pa nesesè, pa vre?

Non, Non, Non, li trè nesesè pou konnen sa!akoz de ki?
Paske ou vle poste yon atik!Frè!Kit ou ap vize pou gradyasyon oswa pouswiv reyalizasyon rechèch syantifik, ou dwe konte sou atik yo pale!

Ekstraksyon asid nikleik yo ta dwe eksperyans ki pi senp ak pi fondamantal.Kalite ekstraksyon asid nikleyik detèmine dirèkteman rezilta eksperyans ki vin apre yo.

Malgre ke mwen te di li anpil fwa, toujou gen anpil zanmi ki pa pran swen.Fwa sa a, mwen deside deplase soti nan atik la!

Enfòmasyon minimòm pou Piblikasyon Eksperyans PCR an tan reyèl, yo rele MIQE, se yon seri direktiv eksperyans fluoresans quantitative te lanse entènasyonalman, ki pwopoze estanda minimòm pou enfòmasyon eksperimantal ki nesesè pou evalye eksperyans fluoresans PCR quantitative ak pibliye atik.Atravè kondisyon eksperimantal ak metòd analiz eksperimantè a bay, evalyatè yo ka pi byen evalye validite konplo eksperimantal chèchè a.

Li ka wè ke nan seksyon an nan ekstraksyon asid nikleyik, atik deteksyon sa yo yo te pwopoze,

"E" endike enfòmasyon ki dwe bay epi "D" endike enfòmasyon ki ta dwe bay si sa nesesè.

Fòm nan trè konplike, an reyalite, mwen vle di ke tout moun bezwen kòmanse nan

pite (D), sede (D), entegrite (E) ak konsistans (E) pou evalye asid nikleik nan kat aspè sa yo.

Dapre abitid eksperimantal, premye pale sou metòd evalyasyon pite ak konsantrasyon.

Mezi OD se metòd deteksyon pi renmen ak pi fasil pou fè eksperyans.Kòm pou prensip la, mwen pa pral antre nan detay isit la.Anpil laboratwa kounye a sèvi ak espektrofotomèt ultra-mikwo pou analize dirèkteman quantitativement echantiyon asid nikleyik.Pandan y ap montre valè absòbe a, pwogram nan bay dirèkteman valè konsantrasyon (asid nikleyè, pwoteyin ak lank fliyoresan) ak rapò ki gen rapò.Kòm pou analiz la nan valè a OD, Sove foto sa a epi ou pral byen.

Lis solisyon inivèsèl valè OD

Sepandan, gen kèk opozisyon ki bezwen pote soti separeman pou ou.

(Apre tout, mwen konnen se ou ki dwe sove epi tann jiskaske ou bezwen yo!)

Remak 1 Ekipman

Valè OD a pral afekte pa diferan ekipman.Osi lontan ke OD260 a nan yon seri sèten, valè OD230 ak OD280 yo gen sans.Pou egzanp, seri absorpsyon komen Eppendorf D30 a nan 260nm se 0 ~ 3A, ak NanoDrop Youn nan Thermo se nan 260nm.Ranje absòbe 0.5 ~ 62.5A.

Nòt 2Reyaktif dilution

Valè OD a ka afekte pa dilution diferan reyaktif.Pou egzanp, lekti OD260/280 nan RNA pirifye nan pH7.5 10mM Tristanpon se ant 1.9-2.1, pandan y ap nannet solisyon akeuzrapò a pral pi ba, petèt sèlman 1.8-2.0, men sa pa vle di ke bon jan kalite a nan RNA chanje Diferans.

Nòt 3Sibstans rezidyèl yo

Egzistans sibstans rezidyèl pral afekte presizyon nan mezi konsantrasyon asid nikleyik, kidonk li nesesè pou fè pou evite pwoteyin, fenol, polisakarid ak rezidi polifenol nan echantiyon asid nikleyik otank posib.

Sepandan, an reyalite, ekstraksyon ak reyaktif òganik se yon metòd fin vye granmoun.Nan twous komèsyal yo, efè ekstraksyon an ka reyalize atravè yon kolòn adsorption ki baze sou silica konbine avèk santrifujasyon, evite reyaktif òganik toksik ak danjere ki difisil pou retire, elatriye pwoblèm nan, tankouTwous ekstraksyon asid nikleyik Foregene a, pa sèvi ak DNase/RNase ak reyaktif òganik toksik pandan tout operasyon an, vit epi san danje., ak laefè sebon(Azar te di ke li te chòv, men mwen konnen ou vle konnen).

Egzanp 1: pwodiksyon ADN jenomik ak pite

Twous Izolasyon ADN Foregene Soil (DE-05511) trete echantiyon tè ki soti nan divès sous, epi kantite ak pite ADN jenomik yo jwenn yo montre nan tablo sa a:
Egzanp 2: Tisi RNA ekstraksyon pwodiksyon ak pite

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) te trete divès echantiyon tisi, epi kantite ak pite RNA yo te jwenn yo montre nan tablo ki anba a (pou tisi sourit):
Sepandan, pa panse ke ou fini ak valè OD a.Èske ou gen nenpòt ki pran swen nan pwen kle yo mwen te trase pou ou nan devan an?

Avi

Yo pral kalkile molekil asid nikleyik ki fragman tou nan absorpsyon an.An sipoze ke ou gen résidus ADN jenomik nan RNA a, valè OD ou a ap parèt trè wo, men konsantrasyon aktyèl la nan RNA pa ka detèmine.Kit RNA ou se Li pa klè si wi ou non gen degradasyon, kidonk nou toujou bezwen yon metòd evalyasyon konplè pou bay yon jijman ki pi egzak, se sa ki, evalyasyon entegrite asid nikleyik mansyone nan MIQE.