Konsèy pou amelyore rekiperasyon lakòl

1. Ogmante chaj echantiyon an pandan elektwoforèz.

2. Sèvi ak tanpon elektwoforèz ki fèk prepare.

3. Lè koupe lakòl, eseye koupe sèlman lakòl la ak bann pou diminye volim nan koupe lakòl: pa bezwen lakòl ak kèk fragman objektif, otreman li pral afekte to rekiperasyon an.

4. Apre fonn de oswa plis moso lakòl, sèvi ak yon tib kèlkeswa kantite gwo volim la epi transfere li nan menm kolòn nan.

5. Solisyon an te ajoute nan sol la ka yon ti kras plis, ki se pi plis fezab nan obligatwa nan ADN nan manbràn an, men jeneralman pa depase 750ul.

6. Kle a nan rekiperasyon jèl se mare ADN nan kolòn nan nan konsantrasyon nan sèl, asidite (chaj) ak idrofobisite nan solisyon an nan kolòn nan.Se poutèt sa, si pH tanpon elektwoforèz la twò wo, yo ka ajoute 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) nan sol la;yo nan lòd yo pi byen entèsepte molekil ADN sou manbràn an, 30% isopropanol ka ajoute nan chalè nan likid la apre yo fin fonn lakòl la.

7. Anvan ou ajoute eluyan an, kite kolòn nan tanperati chanm pou kèk minit (apeprè 10 minit) pou evapore konplètman etanòl la.

8. Finalman, ajoute mwens eluant pou minimize volim rekiperasyon an.Anjeneral, 30-50μl eluyan yo itilize pou elisyon (pa twò piti, otreman li pa pral kapab mouye manbràn an, ki pa fezab elisyon);ti gout yo elisyon yo nan sant manbràn an, pou konplètman eliye ADN ki mare nan manbràn an.

9. Apre yo fin ajoute eluyan an, li ka eliye nan yon beny dlo nan 55 degre pou 5 minit oswa mete yo nan yon beny dlo nan 50 degre pou plis pase 10 minit, oswa sele ak yon parafilm nan 4 degre lannwit lan, ak Lè sa a, santrifuje pou rekiperasyon jou kap vini an, efè a se yon bon bagay.

10.Ajoute eluate santrifuje a tounen nan kolòn adsorption a epi santrifije ankò.

Metòd detaye ak pwosedi pou rekiperasyon pwodwi PCR

1. Òdinè resiklaj kawotchou

Si ou vle refè lakòl la, li pi bon yo sèvi ak yon twous, ki se pratik epi ki gen yon to rekiperasyon yon ti kras pi wo.Si ou reyèlman bezwen refè li manyèlman, ou ka ajoute 3 fwa volim TE apre koupe lakòl la.Apre k ap fonn nan yon beny dlo, fenol, fenol / klowofòm yo ekstrè pwòp, epi etanòl presipite.Se sa.

2. ADN rekiperasyon soti nan jèl ki ba pwen k ap fonn

Pirifikasyon fragman ADN Ajoute TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) ki egal a volim jèl la, epi mete yo nan yon beny dlo 65 °C pou 5 minit pou fonn jèl la nèt.

Apre li te pote nan tanperati chanm, yo te ajoute yon kantite egal nan fenol (satire ak TE, TE sele nan kouch anwo a, epi yo te retire kouch ki pi ba nan fenol), epi yo te melanj lan dousman melanje (pa gen okenn melanje obligatwa), ak santrifuje nan 12,000 rpm pou 3 minit.Repete 1-2 fwa.

Pran supernatant la, ajoute 0.1 volim 3mol/L acetate sodyòm (pH 5.2) ak 2.5 fwa volim etanòl absoli pou pote presipitasyon etanòl.Fonn ADN pirifye a ak yon kantite apwopriye TE, mezire kontni an, epi prepare pou itilize (li ka itilize pou analiz estrikti jèn sib, preparasyon ankèt, elatriye).

3. PCR rekiperasyon ak espesifik anplifikasyon bon

Si espesifik PCR anplifikasyon an bon, li se jis yon senp pirifikasyon ak rekiperasyon pwodwi PCR la.Ou ka ajoute 50ug/ml proteinase K nan pwodwi PCR, 37 degre pou 1h, ekstrè yon fwa ak fenol/klowofòm, ekstrè yon fwa ak klowofòm, epi ajoute 0.1 volim nan surnatant la.Acetate sodyòm te refè pa presipitasyon ak 2.5 volim etanòl absoli.

Pwodwi ki gen rapò:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/