Tradisyonèl transkriptaz ranvèse pa ka tolere tanperati ki wo (tanperati pi bon pou aktivite MMLV se 37-50 ° C, ak AMV se 42-60 ° C).RNA viral ki pi konplèks la pa ka transkri nan ranvèse nan cDNA nan tanperati ki ba, sa ki lakòz efikasite deteksyon Rediksyon an.RT-qPCR tradisyonèl jeneralman mande pou patisipasyon de anzim kle (transkriptaz ranvèse ak ADN polymerase), ki fè li enposib senplifye operasyon an nan sistèm reyaksyon an epi redwi pri a.Isit la nou pral prezante de transkriptaz ranvèse ki reziste wo-tanperati, TtH ak RevTaq.De anzim sa yo tou gen fonksyon ADN polymerase, kidonk yo rele yo anzim bifonksyonèl.

TtH DNA polymerase

Ou dwe tande pale de TtH, ki sòti nan bakteri thermophilic Thermus thermophilus HB8.Nan prezans kasyon divalan tankou Mg2 +, li gen aktivite ADN polymerase.Li se lajman ki itilize nan reyaksyon PCR tankou Taq anzim, men li gen pi wo rezistans chalè pase Taq anzim, kidonk li tou gen yon efè pi bon sou PCR ak modèl kontni GC segondè.

· Anzim sa a fondamantalman pa gen okenn aktivite eksonukleaz 3′→5′ ak aktivite eksonukleaz 5′→3′, kidonk li kapab tou itilize pou sekans dideoxy.

· Anzim sa a gen aktivite RTase.Nan prezans Mn2+, aktivite RTase pral amelyore.Sèvi ak karakteristik sa a, li ka itilize pou fè reyaksyon transkripsyon ranvèse ak reyaksyon PCR nan menm tib la, se sa ki, yon sèl etap RT-PCR.Sepandan, nan prezans Mn2 +, presizyon nan RT-PCR pa wo.Aktivite RT pa gen anyen fè ak aktivite rnaase H.

· Aktivite ogmante nan Tth-DNA polymerase (pH9, pi gwo +55℃～+70℃, maksimòm +95℃) genyen batay la pwoblèm ki te koze pa estrikti segondè RNA.CDNA ki kapab lakòz yo ka anplifye pa PCR ak menm anzim nan prezans iyon Mg2 +.

· Kapasite Tth-DNA polymerase pou fè transkripsyon ranvèse ak anplifikasyon ADN nan tanperati ki wo fè anzim sa a itil pou RT-PCR quantitative, klonaj, ak analiz ekspresyon jèn nan RNA selilè ak viral.
· Yo itilize Tth-DNA polymerase pou RT-PCR pou anplifye RNA jiska 1kb.

Karakteristik ak avantaj

Tth DNA polymerase:

• Asire gwosè pwodwi optimize reyaksyon chèn polymerase (PCR), omwen 1000 bp nan reyaksyon RT-PCR.

• Aksepte modifye deoxyribonucleoside triphosphate kòm yon substrate

• Pa gen rapò ak aktivite RNase H

• Gen gwo estabilite tèmik pou simonte pwoblèm, anjeneral ki gen rapò ak estrikti segondè segondè ki prezan nan RNA

RevTaq RT-PCR DNA polymerase

Yon polymerase ADN ki reziste chalè ak aktivite transkriptaz ranvèse

RevTaq-RT-PCR-DNA polymerase se yon anzim enjenyè, trè rezistan ak chalè, ki gen doub fonksyon ak transkriptaz ranvèse ak aktivite ADN polymerase yo jwenn atravè evolisyon dirije ak atifisyèl.

· Mwatye lavi RevTaq RT-PCR DNA polymerase nan 95°C pi gran pase 40 minit.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase pèmèt transkripsyon ranvèse wo-tanperati dirèkteman nan modèl RNA a, epi etap transcription ranvèse a ka repete plizyè fwa pou jenere plis modèl cDNA.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase pèmèt "zewo-etap" RT-PCR (pa gen okenn etap transcription ranvèse izotèmik), paske nan etap ekstansyon PCR siklik la, transkripsyon ranvèse ak anplifikasyon ADN fèt an menm tan.Sa a tou ankouraje reyaksyon an transcription ranvèse nan tanperati ki wo, kidonk minimize pwoblèm yo rankontre nan fonn estrikti segondè segondè nan RNA nan tanperati ki wo.

· Akòz fòmil cho-start ki baze sou aptamer, RevTaq RT-PCR DNA polymerase ap pwodui pi bon rezilta lè tanperati rkwit ak ekstansyon an pi wo pase 57°C.

· Piske anzim nan reziste chalè, li rekòmande pou konsepsyon primè ak sond ki gen pwen k ap fonn trè wo (> 60 ° C).

· Li rekòmande pou optimize tanperati a nan etap nan recuit / ekstansyon nan yon gradyan tanperati pandan pwosesis la konfigirasyon reyaksyon.

· Plis tanperati a pi wo, se pi wo espesifik PCR la.Sik transkripsyon ranvèse a anjeneral fèt nan yon tanperati ki pi wo pase sik PCR la, paske ibridasyon ADN Primer:RNA Template anjeneral gen yon pwen k ap fonn ki pi wo pase DNA Primer:cDNA Template duplex.

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase se jenetikman Enjenieri ak optimize, ak gwosè a anplikon se ant 60-300 bp.

Limit deteksyon RevTaq RT-PCR DNA polymerase rive nan 4 kopi/

Sistèm reyaksyon optimize a (etablisman primè gwo pwen k ap fonn) yo montre nan figi a.RevTaq RT-PCR DNA polymerase-kondwi RT-PCR montre pi bon sansiblite pase TaqPath 1-etap RT-qPCR mèt melanj, ak pi ba deteksyon echantiyon dilution gradyan.

Plis avantaj:

Fonksyon demaraj rapid → Premye etap denaturasyon tèmik la ka sote.

Hot-start aptamer fòmil → Bay 100% aktivite anzim imedyatman epi anpeche anplifikasyon ki pa espesifik nan tanperati ki ba (<57 ° C).

Fonksyon klivaj → Etap ekstraksyon RNA a omisyon, paske RevTaq RT-PCR DNA polymerase kapab tou trete echantiyon reyaksyon brit yo.Li ka imedyatman detwi manbràn selil yo nan ekaryot, bakteri ak viris nan yon sik RT-PCR cho.

IVD nivo matyè premyè → estanda kalite siperyè ak pri trè konpetitif