RNase se yon mo sansib ke anpil elèv ki souvan fè eksperyans fè ekstraksyon RNA pa vle tande.Konplètman ame, RNA a ki te finalman ekstrè ak reyaktif yo trè toksik fenol ak klowofòm te degrade.Mwen pa rekonsilye!!!Jodi a, ann pran yon gade nan orijin nan pi popilè Rnase la.

Ribonukleaz (RNase), oswa RNase, se yon nukleaz ki ka idrolize RNA nan ti molekil.RNase, kòm yon ti molekil pwoteyin, se nòmalman ki estab .Konvansyonèl tanperati ki wo ak presyon wo esterilizasyon vapè ak inhibiteur pwoteyin pa ka konplètman inaktive li.Estabilite nan RNase sitou soti nan lyezon yo disulfide nan estrikti a.Pou egzanp, RNase a souvan itilize nan pankreyas bovine gen sèlman 124 asid amine, men li gen 4 lyezon disulfid.Kosyon souf ak kosyon disulfid dote RNase ak estabilite tèmik ekselan.Anplis de sa, rnase gen yon pwa molekilè relativman ti epi li ka byen vit retabli konfòmasyon orijinal li nan anpil ka.

Anplis de sa li trè estab,RNases yo omniprésente nan laboratwa a .RNase se yon mekanis defans byolojik.Pou yon selil, RNA ekzojèn souvan fatal.Konpare ak ADN ekzojèn, RNA ekzojèn souvan pi danjere.RNA san pwoblèm mwen tap transkri ak tradui, kidonk prèske tout òganis yo te evolye RNases pou defann kont envazyon an nan RNA ekzojèn.Se poutèt sa, selil bakteri yo kiltive nan laboratwa a ak ou menm ki ekstrè RNA respire bon sant RNase.Likid kò moun (saliv, dlo nan je, elatriye) genyen yon gwo kantite RNase, kidonk pa kriye lè RNA degrade.Plis ou kriye, se pi mal degradasyon RNA!!Sè Daiyu pa apwopriye pou fè ekstraksyon RNA!

Anplis de sa, po delika ou genyen tou yon anpil nan RNase, ak makè yo, pipèt, pòt frijidè, ak manch pòt ki te manyen pa po a gen ladan tou RNase.

Avèk anpil divagasyon, an n pran yon gade nan ki jan fè fas ak RNases.

Premye bagay ke tout moun panse a lè yo retire RNA seDEPC(pirokarbonat dyetil).DEPC sitou denatire pwoteyin nan konbine avèk bag imidazol nan histidine gwoup aktif RNase, kidonk anpeche aktivite anzim la.0.1% DEPC ka gen yon pi bon efè retire sou Rnase, men nou bezwen peye atansyon ke DEPC se yon kanserojèn li te ye, kidonk atansyon espesyal yo ta dwe peye lè w ap itilize li.

Pou RNase, nou bezwen kòmanse nan de aspè,premye a se anpeche aktivite a nan andojèn RNase

Konvansyonèl reyaktif ekstraksyon RNA tankou guanidine isothiocyanate ak DTT ki genyen nan Trizol ka louvri kosyon disulfid la nan RNase, men gen toujou kèk RNases, espesyalman nan echantiyon tisi, kidonk peye atansyon sou tanperati ki ba.

1.Imedyatman plonje echantiyon tisi a nan nitwojèn likid apre w fin retire li, oswa nan yon solisyon komèsyal prezèvasyon RNA.

2.Apre ekstrè RNA echantiyon selil la, ajoute li nan solisyon liz la epi liz li sou bwat glas la.

3. Li pi bon pou itilize nitwojèn likid pou fanm k'ap pile lè echantiyon tisi yo omojeneize.Lè w ap itilize yon homogenizer elektrik san nitwojèn likid, peye atansyon sou konplètman pre-refwadisman adaptè omojèn nan.

Dezyèm lan se DNase ekzojèn

1.Ou dwe konplètman ame, mete yon rad laboratwa, mete yon mask, epi asire w ke ou mete yon pè nouvo gan (pa dwe tèlman ékonomi!! Li ta dwe remake ke Trizol se super korozivite, epi li se tou trè fò nan gan, kidonk pa degoute sou men ou).

2.Tout pwent pipèt yo itilize, tib EP, tib PCR ak lòt ekipman yo dwe trete de-RNase.Li ka tranpe nan 0.1% DEPC ak Lè sa a, presyon anba presyon ki wo.Peye atansyon sou operasyon an nan yon hotte.Tiran lokal yo ka achte dirèkteman consommables pou retire anzim yo.

PS: Kite m di w yon metòd parese.Malgre ke tanperati ki wo ak presyon ki wo pa ka konplètman retire RNase, li pral retire yon gwo pati nan li.2 fwa nan tanperati ki wo ak presyon ki wo gen yon bon efè, ak ekstraksyon nan RNA gen ti efè.

3.Alkòl ka denatire pwoteyin,Se konsa, tab la fè ekstraksyon RNA ka siye ak 75% alkòl , ak gan tou ka flite ak alkòl.

4.Solisyon final la dissolution RNA ak tib santrifujeur yo ta dwe trete tou de-RNase.DEPC dlo se yon solisyon dissolution RNA souvan itilize.Ann pale sou metòd preparasyon ki kòrèk la nan dlo DEPC (sonje remballage DEPC komèsyal la lè ou achte li)

Ajoute DEPC nan dlo ultrapure nan 1:1000, byen souke, kite kanpe lannwit lan nan 37 ° C, epi esterilize nan 121 ° C anba tanperati ki wo ak presyon ki wo pou 15 minit.Dlo DEPC ka estoke nan -20 ° C nan aliquot 1ml.

Finalman, nan rezime: tanperati ki ba se kle a, consommables yo okipe byen, konplètman ame ak mwens pale!

Oke, se li pou estrateji jodi a.Mwen swete w tout konsantrasyon RNA ak pite ou mansyone a.Tou de A260/A280 se 2.0!!!

Natirèlman, si ou itilize yonoperasyon tanperati chanm RNA ekstraksyon twous, ou ka pa rankontre pwoblèm ki anwo yo.

Operasyon nan tanperati chanm, san yo pa ajoute DNase, ekstrè RNA total ki soti nan selil yo nan 11 minit, epi ekstrè RNA total soti nan tisi bèt oswa plant nan 30 minit.

Pou echantiyon esè, tanpri kontakte:overseas@foregene.com

Pwodwi ki gen rapò:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/