Nou te gen eksperyans manifakti.Genyen majorite nan sètifikasyon enpòtan nan mache li yo pou gwo rabè Lachin segondè sansiblite yon sèl etap sond Rt-QpcrTwous V2, Kalite se lavi faktori ', Konsantre sou demann kliyan 'se sous la nan siviv konpayi ak devlopman, Nou konfòme yo ak onètete ak bon lafwa k ap travay atitid, gade pou pi devan pou vini ou!
Nou te gen eksperyans manifakti.Genyen majorite nan sètifikasyon yo enpòtan nan mache li yo pouLachin Taq DNA Polymerase, Qpcr, Konpayi nou an pwomèt: pri rezonab, tan pwodiksyon kout ak sèvis apre-lavant satisfezan, nou menm tou nou akeyi ou vizite faktori nou an nenpòt ki lè ou vle.Swete kounye a nou gen yon bèl ak long tèm biznis ansanm !!!

Deskripsyon

Twous sa a sèvi ak yon sistèm tanpon liz inik ki ka byen vit lage RNA nan echantiyon selil kiltive pou reyaksyon RT-qPCR, kidonk elimine pwosesis pou pirifye RNA ki pran anpil tan ak travayè.Modèl RNA a ka jwenn nan jis 7 minit.5×Direct RT Mix ak 2×Direct qPCR Mix-SYBR reyaktif ki bay twous la ka byen vit ak efektivman jwenn rezilta PCR quantitative an tan reyèl.

5×Direct RT Mix ak 2×Direct qPCR Mix-SYBR gen gwo tolerans inhibitor, epi lisate echantiyon yo ka itilize kòm modèl pou RT-qPCR dirèkteman.Twous sa a gen ladan transkriptaz ranvèse Foregene RNA ki gen gwo afinite, ak Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl.₂, tanpon reyaksyon, PCR optimize ak estabilize.

Espesifikasyon

200 × 20μl Rxns, 1000 × 20μl Rxns

Konpozan twous

Karakteristik & avantaj

■ Senp ak efikas : ak teknoloji Cell Direct RT, echantiyon RNA yo ka jwenn nan 7 minit sèlman.

■ Demann echantiyon an piti, osi ba ke 10 selil yo ka teste.

■ Debi segondè: li ka byen vit detekte RNA nan selil ki kiltive nan plak 384, 96, 24, 12, 6-pi.

■ gonm ADN ka byen vit retire jenom ki lage, redwi anpil enpak sou rezilta eksperimantal ki vin apre yo.

■ Optimize RT ak sistèm qPCR fè transkripsyon ranvèse RT-PCR de etap pi efikas ak PCR pi espesifik, ak plis rezistan nan inhibiteurs reyaksyon RT-qPCR.

Aplikasyon pou twous

Dimansyon aplikasyon: selil kiltive.

- RNA ki te pibliye pa echantiyon lysis: aplikab sèlman nan modèl RT-qPCR nan twous sa a.

- Twous la ka itilize pou rezon sa yo: analiz ekspresyon jèn, verifikasyon efè silans siRNA-medyatè, tès depistaj dwòg, elatriye.

Dyagram

Depo ak etajè lavi

Pati I nan twous sa a ta dwe estoke nan 4℃;Pati II ta dwe estoke nan -20 ℃.

Foregene Protease Plus II ta dwe estoke nan 4 ℃, pa friz nan -20 ℃.

Reyaktif 2×Direct qPCR Mix-SYBR ta dwe estoke nan -20 ℃ nan fè nwa a;si yo itilize souvan, li kapab tou estoke nan 4 ℃ pou depo kout tèm (itilize nan lespas 10 jou). Nou te gen eksperyans manifakti.Genyen majorite nan sètifikasyon yo enpòtan nan mache li yo pou gwo rabè Lachin segondè sansiblite yon sèl-etap sond Rt-Qpcr Twous V2, Kalite se lavi faktori ', Konsantre sou demann kliyan 'se sous la nan siviv konpayi ak devlopman, Nou konfòme yo ak onètete ak bon lafwa k ap travay atitid, gade pou pi devan pou vini ou!
Gwo rabèLachin Taq DNA Polymerase, Qpcr, konpayi nou an pwomès: pri rezonab, tan pwodiksyon kout ak sèvis apre-lavant satisfezan, nou menm tou nou akeyi ou vizite faktori nou an nenpòt ki lè ou vle.Swete kounye a nou gen yon bèl ak long tèm biznis ansanm !!!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit -Taqman

Cat.No.DRT-01021/01022

Pou selil dirèk RT-qPCR lè l sèvi avèk ≤ 1000,000 selil

Entwodiksyon pwodwi

Pwodui sa a sèvi ak yon sistèm tanpon liz inik pou libere rapidman RNA nan echantiyon selil kiltive pou reyaksyon RT-qPCR, elimine pwosesis pirifikasyon RNA ki pran anpil tan ak travayè, epi sèlman 7 minit pou jwenn modèl RNA ki nesesè yo, ak 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman ki bay nan twous la ka jwenn rezilta PCR byen vit ak quantitativeman an tan reyèl.

5 × Dirèk RT Mix ak 2 × Dirèk qPCR Mix-Taqman gen gwo tolerans inhibitor epi yo ka fè efikas ranvèsman ak anplifikasyon espesifik lè l sèvi avèk lysate echantiyon an yo dwe mezire kòm yon modèl.Reyaktif la gen Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl.₂, Tanpon reyaksyon, PCR Optimizer ak Stabilizer, ki ka itilize ak tanpon lysis pou detekte byen vit ak fasil echantiyon, e li gen karakteristik sansiblite segondè, espesifik ak estabilite.

Karakteristik pwodwi

Teknoloji Senp, efikas Cell Direct RT ki pran 7 minit pou jwenn echantiyon RNA.

Kondisyon echantiyon yo piti, epi yo ka itilize yon minimòm de 10 selil kiltive pou eksperimantasyon.

Debi segondè pou akizisyon rapid RNA nan selil kiltive tankou 384, 96, 24, 12, ak plak 6-pi.

ADN Gom se kapab byen vit retire jenom lage, anpil diminye enpak la sou rezilta eksperimantal ki vin apre yo.

Sistèm optimize RT ak qPCR pèmèt RT-PCR de etap ak transkripsyon ranvèse pi efikas, espesifik, ak pi fò tolerans inibitè reyaksyon RT-qPCR.

Aplikasyon pou twous

Dimansyon aplikasyon: selil kiltive.

Egzanp liz entèprete RNA: itilize sèlman kòm yon modèl RT-qPCR de etap.

Twous yo ka itilize pou rezon sa yo: analiz ekspresyon jenetik regilasyon, tès alèl, tès depistaj dwòg, elatriye.

Limit kit yo

Fragman anplifye ≤ 300 bp.

Twous yo itilize pou fèk kiltive selil yo.

Kontwòl kalite pwodwi

Dapre Sistèm Jesyon Kalite Total FOREGENE a, yo teste chak pakèt seri Cell Direct RT-qPCR plizyè fwa pou asire fyab ak estabilite bon jan kalite chak pakèt twous.

Kit sa yo

*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2×Direct qPCR Mix-Taqman ka achte separeman, detay yo bay nan Anèks 1 (PAJ 13).

Kondisyon depo

1. Kondisyon Shipping

Pwosesis la an antye nan tanperati ki ba glas pake bwat transpò, asire ke twous la se nan eta a <4 °C.

2. Kondisyon depo

Sere pati I nan 4 ° C ak Pati II nan -20 ° C.

Foregene Protease Plus II a ta dwe estoke nan 4 ° C, pa nan frizè nan -20 ° C.

Reyaktif 2 × Direct qPCR Mix-Taqman estoke nan -20 ° C, oswa nan 4 ° C pou itilize kout tèm si yo itilize souvan (nan 10 jou).

Enfòmasyon sou eleman twous

Tanpon CL: Bay anviwònman ki nesesè pou reyaksyon liz selil yo.

Tanpon ST: Mete fen sibstans aktif nan lysate la pou evite efè sou RT ki vin apre.

ADN gonm: ADN retire, efè a nan retire genòm nan sou eksperyans ki vin apre.

5 × Direct RT Mix: Gen gwo afinite RNA Foregene Reverse Transcriptase, RNase Inhibitor, dNTPs, estabilize, amelyore, optimisers, ak primè transcription ranvèse pou aliyman pi bon (Random Primer, Oligo(dT)₁₈Jadendanfan).

Foregene Protease Plus II: Nan kontèks tanpon lysis, selil yo lysed pou libere asid nikleyik.

2 × dirèk qPCR Mix-Taqman: reyaktif sa a gen Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl₂, tanpon reyaksyon, PCR optimize, ak estabilize.

20 × ROX Referans Dye: Anjeneral yo itilize sou enstriman anplifikasyon PCR an tan reyèl nan ABI, Stratagene ak lòt konpayi yo, li itilize yo ajiste diferans ki genyen ant tib PCR ak tib ki te koze pa erè dòz PCR.20 × ROX Reference Dye konsantrasyon ki nesesè pou diferan enstriman diferan, epi itilizatè a ka ajoute li dapre konsantrasyon rekòmande enstriman an.

RNase-gratis ddH₂O: RNase-gratis esterilize dlo ultra pi bon kalite pou de-etap RT-qPCR reyaksyon.

Prekosyon:(Asire w ou li prekosyon yo ak anpil atansyon anvan w itilize twous la)

Peye atansyon sou metòd operasyon eksperyans lan pou evite kontaminasyon kwa ant echantiyon yo.

Peye atansyon sou pwòpte anviwònman eksperimantal la ak istansil pou evite kontaminasyon RNase ak degradasyon RNA.

Pran echantiyon selil fre oswa byen konsève epi pa janm sèvi ak echantiyon selil ki repete friz-degel.

5 × Direct qPCR Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman ta dwe evite repete friz-dekonjle, otreman li pral afekte transcription ranvèse ak efikasite PCR.

Preparasyonanvanoperasyon

Asire w ou li enstriksyon yo ak anpil atansyon anvan w itilize twous sa a.Twous Cell Direct RT-qPCR a se senp, pratik, epi rapid pou opere, epi enstriksyon yo bay enfòmasyon konplè sou twous la tout antye ak kijan pou itilize li kòrèkteman.Tanpri prepare materyèl eksperimantal ki nesesè yo ak ekipman anvan ou itilize.

Materyèl eksperimantal ak ekipman

◆ Kilti selil yo.

◆ 1.5 ml oswa 2 ml, RNase-/DNase-Free tib santrifijeur, RNase-/DNase-Free pwent, 0.2 ml esteril tib qPCR.

◆ qPCR machin, pipèt, santrifujeur tab (≥13,400×g) (selon bezwen eksperimantal), elatriye.

Sekirite

◆ Pwodui sa a se pou rezon rechèch syantifik sèlman, tanpri pa sèvi ak li pou rezon pharmaceutique, klinik, manje ak kosmetik.

◆ Lè w ap itilize pwodui chimik, mete rad apwopriye pou laboratwa, gan, linèt pwoteksyon, elatriye.

Operasyongid

Sistèm Lysis selil, sistèm RT, ak pake sipleman solisyon reyaksyon qPCR ka achte separeman, pou plis detay nan Anèks 1 (PAJ 13).

Gid operasyon

A: Egzanp lage RNA

1.Selil yo te pretrete: Lave plak kilti selil la ak PBS frèt, apresa lyse selil yo (10-10).⁶), 10⁶ pase kantite selil yo, yo rekòmande Foregene Cell the an RNA Isolation Kit Total (DE-03111) oswa Animal Total RNA Isolation Kit (DE-03011) pou fè ekstraksyon RNA ak pirifikasyon.

1.1.Selil aderan (plak 24 byen kòm yon egzanp)

1.1.1.Detèmine kantite selil ki nan chak pi, detèmine kantite selil yo se 1 × 10⁵, epi sèvi ak yon pipèt pou retire mwayen kilti a nan plat kilti a.

1.1.2.Ajoute 200 μl 1 × PBS pre-refwadi nan chak pi.Pa pipete repete epi retire PBS nan pwi yo.Panche plak la epi retire otan PBS posib.Kontinye nan etap 2.

1.1.3.Diferan plat kilti selil oswa yon nimewo referans tablo 1-1 nan yon plat kilti selil te ajoute precooled 1 × PBS pou lave selil.

Tablo 1-1: PBS dòz pou diferan kantite selil

Remak：Pou asire yon selil fèm aderan,yon gwo kantite pèt selil evite lè lave.

1.2.Selil sispansyon oswa selil aderan kiltive nan plak ki pa pore

1.2.1.Selil aderan kiltive nan plak ki pa milti byen (selil sispansyon kòmanse nan pwochen etap la 1.2.2), kolekte epi separe selil yo dapre metòd koleksyon selil nòmal la, epi mete yo nan yon plak kilti oswa tib santrifijeur;si yo itilize trypsinization, mande pou santrifujasyon kolekte selil yo epi retire trypsin rezidyèl, ajoute selil PBS resuspend nan selil endividyèl yo dispèse selil yo.

1.2.2.Apre kantite selil yo konte, aliquot selil 1 × 10⁵ youn nan tib santrifuje, kolekte selil pa santrifujasyon nan 1000 × g pou 10 min.

1.2.3.Ajoute 200 μl PBS nan tib santrifij la, pa pipete repete, epi dirèkteman aspire PBS la.ale nan etap 2. (Si difisil pou presipite ak selil yo te resuspende ankò, yo ka fèt 1000 × g santrifuje 10 min apre jete supernatant la, granules selil la kontinye nan etap 2)

2.Cell lysis: Retire tanpon CL, tanperati li ekilibre nan tanperati chanm, ADN gonm ak Foregene Protease Plus II, dapre tablo sa a 1-2 prepare lysis sistèm: (Solisyon Lysis pare pou itilize).

Table1-2: klivaj preparasyon sistèm (Remak: nan preparasyon an sou glas)

3.( Plak 24-well kòm yon egzanp) Pipète 200 μl nan melanj selil liz mèt nan chak pi, Repete kònen 5-10 fwa, Enkube nan tanperati chanm (20-25 ℃) pou 5 min.

Remak：Pou evite fòmasyon nan bul, tanpri lè pipette echèl pipèt te ajiste a 200μl oswa mwens.Selil yo ka parèt twoub apre liz, ki se nòmal.

4.(24-byen plak kòm yon egzanp) yo ajoute nan likid la 20 μl Tanpon ST (diferan sistèm lysis Tanpon ST te ajoute nan yon kantite lajan yo montre nan Tablo 1-3), repete pipet 5-10 fwa, nan tanperati chanm (20-25 ℃) yo te enkube pou 2 min.

Remak：Pwent nan pipèt dispoze anba sifas la, asire ke lisat la te ajoute,pou evite fòmasyon nan ti wonn, tanpri lè pipette echèl pipèt te ajiste a 200μl oswa mwens.

Tablo 1-3：Ajoute tanpon ST

5.Lisat la itilize pou eksperyans RT-qPCR ki vin apre yo.Si eksperyans ki vin apre yo pa ka fèt alè, tanpri kenbe li sou glas pou pa plis pase 2 èdtan, epi estoke nan -20 ℃ oswa -80 ℃ (pa plis pase twa mwa).

B: preparasyon sistèm RT

1.Pran 5 × Direct RT Mix epi mete l sou yon beny glas, kite l fonn natirèlman, epi melanje l dousman pou itilize pita;retire RNase-Free ddH2O epi fonn li epi mete l sou yon beny glas pou itilize pita.Prepare sistèm reyaksyon an sou glas dapre Tablo 2-1 ki anba a.

Tablo 2-1: Preparasyon sistèm reyaksyon RT

2.Apre fini nan fòmilasyon sistèm, dousman melanje ak santrifuje yon ti tan nan tablo sa yo 2 -2 reyaksyon kondisyon RT reyaksyon.

Tablo 2-2: Anviwònman kondisyon reyaksyon RT

3.Apre reyaksyon an fini, yo te mete pwodwi reyaksyon an dirèkteman sou glas pou qPCR, tanpri mete prezèvasyon alontèm -20 ℃ oswa -80 ℃.

Remak: Akòz itilize modèl ki pa pirifye, presipite blan ka parèt nan pwodwi transcription ranvèse a.Sa a se yon fenomèn nòmal.Santrifige supernatant la imedyatman pou eksperyans ki vin apre yo.

Solisyon reyaksyon RT ki kapab lakòz yo ajoute nan pwochen etap reyaksyon an tan reyèl PCR, li rekòmande pou ajoute kantite ki sòti nan 10-30% nan sistèm reyaksyon an.

C: preparasyon sistèm reyaksyon qPCR

1.Approprie kantite B prepare nan etap cDNA modèl dapre tablo sa a 3-1 pou prepare yon sistèm reyaksyon.

Nòt: Kantite modèl cDNA a reprezante 10-30% sistèm qPCR la.Pou egzanp, nan yon sistèm qPCR 20μl, ajoute 2-6 μl nan tanpon lysis, men pa plis pase 6 μl.

2.Optimize bon kondisyon qPCR (tanperati annealing，etc.) pou reyaksyon qPCR (kondisyon reyaksyon yo bay nan Tablo 3-2).

Remak: Eseye itilize kondisyon optimize pou reyaksyon qPCR pou jwenn pi bon rezilta.

Tablo 3-1: Preparasyon sistèm reyaksyon PCR

1 *: Konsantrasyon Jadendanfan ka ajiste nan seri a nan 50-900 nM lè pèfòmans reyaksyon Jadendanfan se pòv.

Remak: Sistèm qPCR la ka ajiste selon bezwen eksperimantal ak modèl siklik fluoresans.Pou qPCR nan yon 50μl sistèm, ajiste dòz la reyaktif pwopòsyonèl dapre 20 laμl sistèm.

2*: Chwazi konsantrasyon final apwopriye ROX Reference Dye dapre fluoresans quantitative tèmik sikilasyon an.Yo montre konsantrasyon ROX Reference Dye ki pi apwopwiye pou siklis quantitative fluoresans komen nan tablo ki anba a:

Tablo 3-2: Yo bay kondisyon reyaksyon qPCR

Remak: Yo nan lòd yo jwenn pi bon efè qPCR, PCR gradyan ka itilize pou optimize kondisyon reyaksyon yo pou diferan modèl ak diferan primè.Kondisyon reyaksyon PCR varye selon analizeur fluoresans, modèl, jadendanfan, elatriye. Nan operasyon an espesifik, kondisyon reyaksyon optimal yo bezwen fèt dapre kondisyon espesifik fluoresans quantitative tèmik sikilasyon an, kalite modèl, gwosè fragman enterè a, sekans baz fragman anplifye a ak kontni GC ak longè primè, ki gen ladan tanperati rkwit, tan reyaksyon, elatriye.

Tan reyèl PCR prensip konsepsyon primè

Antrènman Avant ak Ranvèse Primer

Pou Real Time PCR, konsepsyon primè trè enpòtan.Jadendanfan yo gen rapò ak espesifik ak efikasite nan anplifikasyon PCR, epi yo ka fèt an referans a prensip sa yo:

◆ Longè Primer: 18-30bp.

◆ GC kontni: 40-60%.

◆ Valè Tm: Lojisyèl konsepsyon Primer, tankou Primer 5, ka bay valè Tm Jadendanfan an.Valè Tm nan primè yo en ak en yo ta dwe pi pre ke posib.Ou ka itilize fòmil kalkil Tm tou: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Lè w ap fè PCR, jeneralman yo chwazi yon tanperati ki pi ba pase 5 °C valè Jadendanfan Tm kòm tanperati a (ogmantasyon ki koresponn lan nan tanperati a ka ogmante espesifik reyaksyon PCR la).

◆ Premye ak pwodwi PCR:

◆ Longè pwodwi anplifikasyon PCR konsepsyon primè se de preferans 100-150bp.

◆ Premye konsepsyon nan zòn estriktirèl segondè modèl la ta dwe evite otank posib.

◆ Evite fòmasyon 2 oswa plis baz konplemantè ant pwent 3′ nan premye en ak en.

◆ Primer 3′ baz tèminal pa ka prezan ak 3 adisyonèl youn apre lòt G oswa C.

◆ Primè yo tèt yo pa ka gen estrikti konplemantè, otreman yon estrikti epengl pral fòme, ki afekte anplifikasyon PCR.

◆ ATCG ta dwe distribye menm jan posib nan sekans Jadendanfan an, epi yo ta dwe evite baz tèminal 3′ kòm T.

Apendis1：Cell DirectRT-qPCR Konpozan twoust sipleman pake

1.Selil Lysis Solisyon