Cell Direct RT qPCR Twous—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready Twous qRT-PCR yon sèl etap
Deskripsyon
Twous sa a sèvi ak yon sistèm tanpon liz inik ki ka byen vit lage RNA nan echantiyon selil kiltive pou reyaksyon RT-qPCR, kidonk elimine pwosesis pou pirifye RNA ki pran anpil tan ak travayè.Modèl RNA a ka jwenn nan jis 7 minit.5 la×Direct RT Mix ak 2×Dirèk qPCR Mix-SYBR reyaktif ki bay twous la ka byen vit ak efektivman jwenn rezilta PCR quantitative an tan reyèl.
5×Direct RT Mix ak 2×Dirèk qPCR Mix-SYBR gen gwo tolerans inhibitor, epi lis echantiyon yo ka itilize kòm modèl pou RT-qPCR dirèkteman.Twous sa a gen ladan transkriptaz ranvèse Foregene RNA ki gen gwo afinite, ak Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl.2, tanpon reyaksyon, PCR optimize ak estabilize.
Espesifikasyon
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Konpozan twous
| Pati I | Tanpon CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Tanpon ST | |
| Pati II | Gom ADN |
| 5 × Dirèk RT Mix | |
| 2 × Dirèk qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × ROX Referans Dye | |
| RNase-gratis ddH2O | |
| Enstriksyon yo | |
Karakteristik & avantaj
■Senp ak efikas: ak teknoloji Cell Direct RT, echantiyon RNA yo ka jwenn nan jis 7 minit.
■ Demann echantiyon an piti, osi ba ke 10 selil yo ka teste.
■ Debi segondè: li ka byen vit detekte RNA nan selil ki kiltive nan plak 384, 96, 24, 12, 6-pi.
■ gonm ADN ka byen vit retire jenom ki lage, redwi anpil enpak sou rezilta eksperimantal ki vin apre yo.
■ Optimize RT ak sistèm qPCR fè transkripsyon ranvèse RT-PCR de etap pi efikas ak PCR pi espesifik, ak plis rezistan nan inhibiteurs reyaksyon RT-qPCR.
Aplikasyon pou twous
Dimansyon aplikasyon: selil kiltive.
- RNA ki te pibliye pa echantiyon lysis: aplikab sèlman nan modèl RT-qPCR nan twous sa a.
- Twous la ka itilize pou rezon sa yo: analiz ekspresyon jèn, verifikasyon efè silans siRNA-medyatè, tès depistaj dwòg, elatriye.
Dyagram
Depo ak etajè lavi
Pati I nan twous sa a ta dwe estoke nan 4℃;Pati II ta dwe estoke nan -20 ℃.
Foregene Protease Plus II ta dwe estoke nan 4℃, pa friz nan -20 ℃.
Reyaktif 2×Dirèk qPCR Mix-SYBR ta dwe estoke nan -20℃nan fè nwa a;si yo itilize souvan, li kapab tou estoke nan 4℃ pou depo kout tèm (itilize nan lespas 10 jou).
Tan reyèl PCR prensip konsepsyon primè
Antrènman Avant ak Ranvèse Primer
Pou Real Time PCR, konsepsyon primè trè enpòtan.Jadendanfan yo gen rapò ak espesifik ak efikasite nan anplifikasyon PCR, epi yo ka fèt an referans a prensip sa yo:
Longè Primer: 18-30bp.
Kontni GC: 40-60%.
Valè Tm: Lojisyèl konsepsyon Primer, tankou Primer 5, ka bay valè Tm Jadendanfan an.Valè Tm nan primè yo en ak en yo ta dwe pi pre ke posib.Ou ka itilize fòmil kalkil Tm tou: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Lè w ap fè PCR, jeneralman yo chwazi yon tanperati ki pi ba pase 5 °C valè Jadendanfan Tm kòm tanperati a (ogmantasyon ki koresponn lan nan tanperati a ka ogmante espesifik reyaksyon PCR la).
Premye ak pwodwi PCR:
Design Jadendanfan PCR anplifikasyon pwodwi longè se de preferans 100-150bp.
Yo ta dwe evite primè konsepsyon nan zòn nan estrikti segondè nan modèl la otank posib.
Evite fòmasyon 2 oswa plis baz konplemantè ant pwent 3′ nan primè en ak en.
Primer 3′ baz tèminal pa ka prezan ak 3 adisyonèl youn apre lòt G oswa C.
Jadendanfan yo tèt yo pa ka gen estrikti konplemantè, otreman yon estrikti epengl pral fòme, ki afekte anplifikasyon PCR.
ATCG ta dwe distribye menm jan posib nan sekans Jadendanfan an, epi yo ta dwe evite baz tèminal 3′ kòm T.
Anèks 1: Cell Direct RT-qPCR Kit eleman sipleman pake
1.Solisyon liz selil
|
| |||
| Konpozan twous (sistèm lysis 24-well / byen) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Patimwen | Tanpon CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Tanpon ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PatiII | Gom ADN | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Melanje
|
| |
| Konpozan twous (20 μl sistèm reyaksyon) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Dirèk RT Mix | 800 μl |
| RNase-gratis ddH2O | 1.7 ml × 2 |
|
| ||
| Konpozan twous (20 μl sistèm reyaksyon) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Dirèk qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 50 × ROX Referans Dye | 40 μl | 200 μl |
| RNase-gratis ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Manyèl Enstriksyon:
