(96-byen) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Twous – Taqman
Deskripsyon
La(96-byen) QuickEasyTM Selil Direct RT-qPCR Twous–Taqmanbayyon sistèm tanpon liz inikto byen vit lage RNAsoti nan selil kiltiveechantiyon pou reyaksyon RT-qPCR, elimine tan konsome ak travayèPwosesis pou pirifye RNA, epi sèlman pran 7 minit pou jwenn modèl RNA ki nesesè yo.La5 × Dirèk RT Mixepi2 × Dirèk qPCR Mix-SYBRbay nan bwat la ka byen vit akefektivman jwenn quantitative an tan reyèlRezilta PCR.
5 × Dirèk RT Mix ak 2 × Dirèk qPCR Mix-Taqman gen gwo tolerans inibitè, epi yo ka itilize lisate echantiyon an yo dwe teste kòm yon modèl pou transkripsyon ranvèse efikas ak anplifikasyon espesifik.Reyaktif la gen Foregene inik Reverse Transcriptase ak gwo afinite pou RNA, osi byen ke Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl.2 , tanpon reyaksyon, PCR optimize ak estabilize, epi yo ka itilize ansanm ak tanpon nan lysis yo detekte echantiyon an byen vit, fasil ak presizyon, epi li gen karakteristik sa yo nan sansiblite segondè, espesifik espesifik ak bon estabilite.
Twous la vize mikwo-sistèm liz selil 96 byen kiltive, e li gen bon inifòmite ak konsistans;konpozan twous yo bay 96 reyaksyon lysis, 96 reyaksyon ranvèse transkripsyon ak 96 × 2 reyaksyon qPCR, ki ka satisfè plak la selil 96-byen pou itilize yon sèl-fwa, evite polisyon an ki te koze pa repete ouvèti, konjelasyon ak dekonjle reyaktif ak degradasyon nan pèfòmans reyaktif.
Konpozan twous
| Konpozisyon twous ( 50 μL lysis system/20 μLRT sistèm reyaksyon /20μL qPCR sistèm reyaksyon) | DRT-03021 | Remak | |
| 96T | |||
| PatiI | TanponCL | 5 ml | SelilLysis |
| ForegeneProteaz Plus II | 100 μL | ||
| TanponST | 500 μL | ||
| Pati II | ADNGom | 100 μL | |
| 5 × Dirèk RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2 × Dirèk qPCR Mix-Taqman | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX Referans Dye | 400µL | ||
| RNase- GratisddH2 O | 1.7mL |
| |
| Manyèl | 1 moso | 1 pòsyon | |
*: Gom ADN reyaktif liz la enkli nan Pati II twous la;Selil Lysis, RT, ak konpozan qPCR ka achte separeman.
Karakteristik & avantaj
■Senp ak efikas: ak teknoloji Cell Direct RT, echantiyon RNA yo ka jwenn nan jis 7 minit.
■ Demann echantiyon an piti, osi ba ke 10 selil yo ka teste.
■ Debi segondè: li ka byen vit detekte RNA nan selil ki kiltive nan plak 384, 96, 24, 12, 6-pi.
■ gonm ADN ka byen vit retire jenom ki lage, redwi anpil enpak sou rezilta eksperimantal ki vin apre yo.
■ Optimize RT ak sistèm qPCR fè transkripsyon ranvèse RT-PCR de etap pi efikas ak PCR pi espesifik, ak plis rezistan nan inhibiteurs reyaksyon RT-qPCR.
Aplikasyon pou twous
Dimansyon aplikasyon: selil kiltive.
- RNA ki te pibliye pa echantiyon lysis: aplikab sèlman nan modèl RT-qPCR nan twous sa a.
- Twous la ka itilize pou rezon sa yo: analiz ekspresyon jèn, verifikasyon efè silans siRNA-medyatè, tès depistaj dwòg, elatriye.
Depo ak etajè lavi
Pati I nan twous sa a ta dwe estoke nan 4℃;Pati II ta dwe estoke nan -20 ℃.
Foregene Protease Plus II ta dwe estoke nan 4℃, pa friz nan -20 ℃.
Reyaktif 2×Dirèk qPCR Mix-Taqman ta dwe estoke nan -20℃nan fè nwa a;si yo itilize souvan, li kapab tou estoke nan 4℃ pou depo kout tèm (itilize nan lespas 10 jou).
Tan reyèl PCR prensip konsepsyon primè
Antrènman Avant ak Ranvèse Primer
Pou Real Time PCR, konsepsyon primè trè enpòtan.Jadendanfan yo gen rapò ak espesifik ak efikasite nan anplifikasyon PCR, epi yo ka fèt an referans a prensip sa yo:
- Longè Primer: 18-30bp.
- Kontni GC: 40-60%.
- Valè Tm: Lojisyèl konsepsyon Primer, tankou Primer 5, ka bay valè Tm Jadendanfan an.Valè Tm nan primè yo en ak en yo ta dwe pi pre ke posib.Ou ka itilize fòmil kalkil Tm tou: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Lè w ap fè PCR, jeneralman yo chwazi yon tanperati ki pi ba pase 5 °C valè Jadendanfan Tm kòm tanperati a (ogmantasyon ki koresponn lan nan tanperati a ka ogmante espesifik reyaksyon PCR la).
- Premye ak pwodwi PCR:
- Design Jadendanfan PCR anplifikasyon pwodwi longè se de preferans 100-150bp.
- Yo ta dwe evite primè konsepsyon nan zòn nan estrikti segondè nan modèl la otank posib.
- Evite fòmasyon 2 oswa plis baz konplemantè ant pwent 3′ nan primè en ak en.
- Primer 3′ baz tèminal pa ka prezan ak 3 adisyonèl youn apre lòt G oswa C.
- Jadendanfan yo tèt yo pa ka gen estrikti konplemantè, otreman yon estrikti epengl pral fòme, ki afekte anplifikasyon PCR.
- ATCG ta dwe distribye menm jan posib nan sekans Jadendanfan an, epi yo ta dwe evite baz tèminal 3′ kòm T.
Apendis1:Cell DirectRT-qPCR Konpozan twoust sipleman pake
1.Selil Lysis Solisyon
| Solisyon liz selil | |||
| Konpozan twous (sistèm lysis 24-well / byen) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Patimwen | Tanpon CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Tanpon ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PatiII | Gom ADN | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Konpozan twous (20 μl sistèm reyaksyon) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Dirèk RT Mix | 800 μl |
| RNase-gratis ddH2O | 1.7 ml × 2 |
| qPCR Melanje | ||
| Konpozan twous (20 μl sistèm reyaksyon) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Dirèk qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20 × ROX Referans Dye | 40 μl | 200 μl |
| RNase-gratis ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Manyèl Enstriksyon:
