Cell Direct RT qPCR Twous—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Kits qRT-PCR yon sèl etap Sonde
Deskripsyon
Pwodui sa a sèvi ak yon sistèm tanpon liz inik pou libere rapidman RNA nan echantiyon selil kiltive pou reyaksyon RT-qPCR, elimine pwosesis pirifikasyon RNA ki pran anpil tan ak travayè, epi sèlman 7 minit pou jwenn modèl RNA ki nesesè yo, ak 5 × Direct RT Mix, 2 × Direct qPCR Mix-Taqman ki bay nan twous la ka jwenn rezilta PCR byen vit ak quantitativeman an tan reyèl.
5 × Dirèk RT Mix ak 2 × Dirèk qPCR Mix-Taqman gen gwo tolerans inhibitor epi yo ka fè efikas ranvèsman ak anplifikasyon espesifik lè l sèvi avèk lysate echantiyon an yo dwe mezire kòm yon modèl.Reyaktif la gen Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl.2, Tanpon reyaksyon, PCR Optimizer ak Stabilizer, ki ka itilize ak tanpon lysis pou detekte byen vit ak fasil echantiyon, e li gen karakteristik sansiblite segondè, espesifik ak estabilite.
Espesifikasyon
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Konpozan twous
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Konpozan twous 20μl qPCR Reyaksyon Sistèm | DRT-01021 | DRT-01022 | Remak | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Pati I | Tanpon CL | 4 ml | 20 ml | Liz selil |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Tanpon ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Pati II | Gom ADN | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2 × dirèk qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 | qPCR | |
| 20 × ROX Referans Dye | 40 μl | 200 μl | ||
| RNase-gratis ddH2O | 1.7 ml | 10 ml | ||
| Manyèl Enstriksyon | 1 moso | 1 moso | ||
*:Liz selil, 5×Direct RT Mix, 2×Direct qPCR Mix-Taqman ka achte separeman
Karakteristik & avantaj
■Senp ak efikas: ak teknoloji Cell Direct RT, echantiyon RNA yo ka jwenn nan jis 7 minit.
■ Demann echantiyon an piti, osi ba ke 10 selil yo ka teste.
■ Debi segondè: li ka byen vit detekte RNA nan selil ki kiltive nan plak 384, 96, 24, 12, 6-pi.
■ gonm ADN ka byen vit retire jenom ki lage, redwi anpil enpak sou rezilta eksperimantal ki vin apre yo.
■ Optimize RT ak sistèm qPCR fè transkripsyon ranvèse RT-PCR de etap pi efikas ak PCR pi espesifik, ak plis rezistan nan inhibiteurs reyaksyon RT-qPCR.
Aplikasyon pou twous
Dimansyon aplikasyon: selil kiltive.
- RNA ki te pibliye pa echantiyon lysis: aplikab sèlman nan modèl RT-qPCR nan twous sa a.
- Twous la ka itilize pou rezon sa yo: analiz ekspresyon jèn, verifikasyon efè silans siRNA-medyatè, tès depistaj dwòg, elatriye.
Depo ak etajè lavi
Pati I nan twous sa a ta dwe estoke nan 4℃;Pati II ta dwe estoke nan -20 ℃.
Foregene Protease Plus II ta dwe estoke nan 4℃, pa friz nan -20 ℃.
Reyaktif 2×Dirèk qPCR Mix-Taqman ta dwe estoke nan -20℃nan fè nwa a;si yo itilize souvan, li kapab tou estoke nan 4℃ pou depo kout tèm (itilize nan lespas 10 jou).
Tan reyèl PCR prensip konsepsyon primè
Antrènman Avant ak Ranvèse Primer
Pou Real Time PCR, konsepsyon primè trè enpòtan.Jadendanfan yo gen rapò ak espesifik ak efikasite nan anplifikasyon PCR, epi yo ka fèt an referans a prensip sa yo:
- Longè Primer: 18-30bp.
- Kontni GC: 40-60%.
- Valè Tm: Lojisyèl konsepsyon Primer, tankou Primer 5, ka bay valè Tm Jadendanfan an.Valè Tm nan primè yo en ak en yo ta dwe pi pre ke posib.Ou ka itilize fòmil kalkil Tm tou: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Lè w ap fè PCR, jeneralman yo chwazi yon tanperati ki pi ba pase 5 °C valè Jadendanfan Tm kòm tanperati a (ogmantasyon ki koresponn lan nan tanperati a ka ogmante espesifik reyaksyon PCR la).
- Premye ak pwodwi PCR:
- Design Jadendanfan PCR anplifikasyon pwodwi longè se de preferans 100-150bp.
- Yo ta dwe evite primè konsepsyon nan zòn nan estrikti segondè nan modèl la otank posib.
- Evite fòmasyon 2 oswa plis baz konplemantè ant pwent 3′ nan primè en ak en.
- Primer 3′ baz tèminal pa ka prezan ak 3 adisyonèl youn apre lòt G oswa C.
- Jadendanfan yo tèt yo pa ka gen estrikti konplemantè, otreman yon estrikti epengl pral fòme, ki afekte anplifikasyon PCR.
- ATCG ta dwe distribye menm jan posib nan sekans Jadendanfan an, epi yo ta dwe evite baz tèminal 3′ kòm T.
Apendis1:Cell DirectRT-qPCR Konpozan twoust sipleman pake
1.Selil Lysis Solisyon
| Solisyon liz selil | |||
| Konpozan twous (sistèm lysis 24-well / byen) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Patimwen | Tanpon CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Tanpon ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PatiII | Gom ADN | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Konpozan twous (20 μl sistèm reyaksyon) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Dirèk RT Mix | 800 μl |
| RNase-gratis ddH2O | 1.7 ml × 2 |
| qPCR Melanje | ||
| Konpozan twous (20 μl sistèm reyaksyon) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Dirèk qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20 × ROX Referans Dye | 40 μl | 200 μl |
| RNase-gratis ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
Manyèl Enstriksyon:
