Pa gen siyal anplifikasyon

1.Taq DNA Polymerase nan twous la pèdi aktivite li akòz move depo oswa ekspirasyon twous la.
Rekòmandasyon: Konfime kondisyon yo depo nan twous la;re-ajoute yon kantite apwopriye Taq DNA Polymerase nan sistèm PCR la oswa achte yon nouvo Kit PCR an tan reyèl pou eksperyans ki gen rapò.

2.Gen anpil inibitè nan Taq DNA Polymerase nan modèl ADN la.
Sijesyon: Repirifye modèl la oswa diminye kantite modèl yo itilize.

3.Mg2 + konsantrasyon an pa apwopriye.
Rekòmandasyon: Konsantrasyon Mg2 + nan 2× Real PCR Mix nou bay se 3.5mM.Sepandan, pou kèk primè espesyal ak modèl, konsantrasyon Mg2 + ka pi wo.Se poutèt sa, ou ka ajoute dirèkteman MgCl2 pou optimize konsantrasyon Mg2 +.Li rekòmande pou ogmante Mg2 + 0.5mM chak fwa pou optimize.

4.Kondisyon anplifikasyon PCR yo pa apwopriye, epi sekans Jadendanfan an oswa konsantrasyon se move.
Sijesyon: konfime kòrèkteman nan sekans Jadendanfan an ak Jadendanfan an pa te degrade;si siyal anplifikasyon an pa bon, eseye bese tanperati rkwit la epi ajiste konsantrasyon primè a kòmsadwa.

5. Kantite modèl la twò piti oswa twòp.
Rekòmandasyon: Fè dilution gradyan linearization modèl, epi chwazi konsantrasyon modèl la ak pi bon efè PCR pou eksperyans PCR an tan reyèl.

NTC gen valè fluoresans twò wo

1.Kontaminasyon reyaktif ki te koze pandan operasyon an.
Rekòmandasyon: Ranplase ak nouvo reyaktif pou eksperyans PCR an tan reyèl.

2.Kontaminasyon te fèt pandan preparasyon sistèm reyaksyon PCR la.
Rekòmandasyon: Pran mezi pwoteksyon nesesè pandan operasyon an, tankou: mete gan an latèks, sèvi ak yon pwent pipèt ak yon filtè, elatriye.

3.Primè yo degrade, ak degradasyon nan premye yo pral lakòz anplifikasyon ki pa espesifik.
Sijesyon: Sèvi ak elektwoforèz SDS-PAGE pou detekte si primary yo degrade, epi ranplase yo ak nouvo primè pou eksperyans PCR an tan reyèl.

Primer dimer oswa anplifikasyon ki pa espesifik

1.Mg2 + konsantrasyon an pa apwopriye.
Rekòmandasyon: Konsantrasyon Mg2+ nan 2× Real PCR EasyTM Mix nou bay la se 3.5 mM.Sepandan, pou kèk primè espesyal ak modèl, konsantrasyon Mg2 + ka pi wo.Se poutèt sa, ou ka ajoute dirèkteman MgCl2 pou optimize konsantrasyon Mg2 +.Li rekòmande pou ogmante Mg2 + 0.5mM chak fwa pou optimize.

2.Tanperati annealing PCR la twò ba.
Sijesyon: Ogmante tanperati rkwir PCR la pa 1℃ oswa 2℃ chak fwa.

3.Pwodwi PCR la twò lontan.
Rekòmandasyon: Longè an tan reyèl PCR pwodwi a ta dwe ant 100-150bp, pa plis pase 500bp.

4.Primè yo degrade, ak degradasyon nan premye yo ap mennen nan aparans nan anplifikasyon espesifik.
Sijesyon: Sèvi ak elektwoforèz SDS-PAGE pou detekte si primary yo degrade, epi ranplase yo ak nouvo primè pou eksperyans PCR an tan reyèl.

5.Sistèm PCR la move, oswa sistèm nan twò piti.
Sijesyon: Sistèm reyaksyon PCR la twò piti ap lakòz presizyon deteksyon an diminye.Li pi bon pou itilize sistèm reyaksyon ki rekòmande pa enstriman PCR quantitative pou re-kouri eksperyans Real Time PCR la.

Pòv repetibilite nan valè quantitative

1.Enstriman an fonksyone byen.
Sijesyon: Ka gen erè ant chak twou PCR nan enstriman an, sa ki lakòz repwodiksyon pòv pandan jesyon tanperati oswa deteksyon.Tanpri tcheke dapre enstriksyon yo nan enstriman ki koresponn lan.

2.Pite echantiyon an pa bon.
Rekòmandasyon: Echantiyon enpurte yo pral mennen nan repwodiksyon pòv nan eksperyans la, ki gen ladann pite nan modèl la ak primè.Li pi bon pou pirifye modèl la, epi premye yo pirifye pi byen pa SDS-PAGE.

3.Preparasyon sistèm PCR ak tan depo a twò lontan.
Sijesyon: Sèvi ak sistèm an tan reyèl PCR pou eksperyans PCR imedyatman apre preparasyon an, epi pa kite li sou kote pou twò lontan.

4.Kondisyon anplifikasyon PCR yo pa apwopriye, epi sekans Jadendanfan an oswa konsantrasyon se move.
Sijesyon: konfime kòrèkteman nan sekans Jadendanfan an ak Jadendanfan an pa te degrade;si siyal anplifikasyon an pa bon, eseye bese tanperati rkwit la epi ajiste konsantrasyon primè a kòmsadwa.

5.Sistèm PCR la move, oswa sistèm nan twò piti.
Sijesyon: Sistèm reyaksyon PCR la twò piti ap lakòz presizyon deteksyon an diminye.Li pi bon pou itilize sistèm reyaksyon ki rekòmande pa enstriman PCR quantitative pou re-kouri eksperyans Real Time PCR la.