Escherichia coli O157:H7 Twous Deteksyon Asid Nukleik (Metòd Sond Fluoresan PCR)
Deskripsyon Kit:
Cat.No.FP102
Yo itilize li pou deteksyon rapid ak tès depistaj E. coli O157:H7 nan manje, manje, echantiyon dlo ak echantiyon anviwònman an.
Deskripsyon
Yo itilize li pou deteksyon rapid ak tès depistaj E. coli O157:H7 nan manje, manje, echantiyon dlo ak echantiyon anviwònman an.
[Pwensip tès la]Dapre prensip teknoloji PCR fliyoresan yo, yo fèt primè espesifik ak sond Taqman pou jèn espesifik Escherichia coli O157: H7, epi detekte pa yon enstriman PCR fliyoresan, pou reyalize deteksyon Escherichia coli O157: H7 Kalitatif ADN.
Kontni Twous
Remak: pwofonde chanèl ROX pa enkli.
| Copozan | Spesifikasyon | Qkantite |
| Tanpon A | Tib | 1 |
| Tanpon B | Tib | 1 |
| Kontwòl pozitif | Tib | 1 |
| Kontwòl negatif | Tib | 1 |
Itilizasyon espere
Li itilize pou deteksyon rapid ak tès depistaj E. coli O157:H7 nan manje, manje, echantiyon dlo ak echantiyon anviwònman an.
Kondisyon Depo ak Dat ekspirasyon
Sere nan -20 ℃ nan fè nwa a epi evite repete konjelasyon ak dekonjle.
Peryòd validite a se 12mwa, epi dat pwodiksyon an montre sou anbalaj ekstèn lan.
Enstriman ak Consommables
Enstriman PCR fliyoresan quantitative, zam pipèt ak konsèy matche, shaker toubiyon, mini santrifijeur.
Itilizasyon
1. Pwosesis echantiyon
1.1 Kalite echantiyon: Twous sa a apwopriye pou manje, manje, echantiyon dlo ak lòt echantiyon yo sispèk yo kontamine pa Escherichia coli O157:H7.Pou pwodwi vyann ki trete gwo twou san fon, bwason ak lòt sibstans ki gen pigman, yo bezwen rense pou evite afekte koleksyon siyal fluoresans lan.
1.2 Pwosesis echantiyon: Gade "GB 4789.10-2016 Food Safety National Standard Food Microbyological Examination of Escherichia coli O157: H7 Test" pou preparasyon echantiyon, kilti anrichisman ak izòlman Escherichia coli O157: H7.
- Nekstraksyon asid ukleik
Pran 20 mL nan solisyon anrichisman nan yon tib santrifij 1.5 mL, ajoute 200 μL nan lysate mikwòb (se twous adisyonèl obligatwa), vortex pou 30 segonn, santrifuje yon ti tan, epi mete sou kote.
Remak: Ekstraksyon asid nikleyik soti nan lysate la ta dwe fini nan lespas 10 minit, epi yo pa ka estoke pou yon tan long.
3. Anplifikasyon asid nikleik
3.1 Limen enstriman PCR quantitative fluoresan pou itilize.
Tanpon A ak Tanpon B nan twous la, fonn yo byen, epi santrifuje yon ti tan.Ajoute 18 μL Tanpon A ak 2 μL Tanpon B nan chak tib reyaksyon PCR.Lè sa a, ajoute 5 mL chak nan kontwòl negatif, ekstrè asid nikleyik, ak kontwòl pozitif nan tib reyaksyon PCR, bouchon tib yo, epi santrifuje yon ti tan.
3.3 Transfere tib reyaksyon PCR la nan yon machin PCR fliyoresan, epi sèvi ak pwosedi sa yo pou fè eksperyans anplifikasyon: chwazi 25 mL pou sistèm reyaksyon an, kolekte siyal fliyoresan a 60 °C pou chak sik, epi chwazi FAM pou kanal deteksyon an.
| Etap | Pwogram | Kantite sik |
| 1 | 37℃ 5min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 40 |
| 60℃ 30s (kolekte fliyoresans) |
Gid pou analiz pwoblèm
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Pa gen okenn RNA ka ekstrè oswa sede a nan asid nikleyik ba
Anjeneral gen anpil faktè ki afekte efikasite rekiperasyon, tankou: echantiyon kontni RNA, metòd operasyon, volim elisyon, elatriye.
Analiz de kòz komen:
1.Ice beny oswa ba-tanperati (4 ° C) santrifujasyon pandan operasyon an.
Sijesyon: Tanperati chanm (15-25 ° C) operasyon, pa janm benyen glas ak santrifujeur tanperati ki ba.
2. Move depo echantiyon oswa depo echantiyon pou twò lontan.
Sijesyon: Sere echantiyon yo nan -80 ° C oswa friz nan nitwojèn likid, epi evite repete itilize friz-dekonjle;eseye sèvi ak echantiyon frèch kolekte pou fè ekstraksyon RNA.
3.Liz echantiyon ensifizan
Rekòmandasyon: Tanpri asire ke echantiyon an ak solisyon k ap travay la (lineyè Acrylamide) yo te byen melanje ak enkube pou 10 min nan tanperati chanm (15-25 ° C)
4.Eluyan an te ajoute mal
Rekòmandasyon: Asire w ke RNase-Free ddH2O ajoute nan mitan manbràn kolòn pou pirifye a.
5.Move volim nan etanòl anidrid nan tanpon viRW2
Sijesyon: Tanpri swiv enstriksyon yo, ajoute volim ki kòrèk la nan etanòl anidrid nan tanpon viRW2 epi melanje yo byen anvan ou sèvi ak twous la.
6.Move itilizasyon echantiyon.
Sijesyon: 200μl echantiyon pou chak 500μl tanpon viRL.Twòp volim echantiyon sa ap lakòz pousantaj ekstraksyon RNA redwi.
7.Move volim elisyon oswa elisyon enkonplè.
Sijesyon: volim eluyan kolòn pou pirifye a se 30-50μl;si efè elisyon an pa satisfezan, li rekòmande pou ajoute pre-chofe RNase-Free ddH.2O ak pwolonje tan an mete nan tanperati chanm, tankou 5-10min
8.Purification kolòn gen etanòl rezidi apre rense nan tanpon viRW2.
Sijesyon: Si etanòl toujou rete apre rense nan tanpon viRW2 ak santrifijasyon tib vid pou 2min, kolòn pou pirifye a ka kite nan tanperati chanm pou 5min apre santrifujasyon tib vid pou retire konplètman etanòl ki rete.
Degradasyon nan molekil RNA pirifye
Kalite RNA pirifye a gen rapò ak faktè tankou depo echantiyon, kontaminasyon RNase, ak operasyon.
Analiz de kòz komen:
1.Echantiyon yo kolekte pa te sove nan tan.
Sijesyon: Si echantiyon an pa itilize nan tan apre koleksyon an, tanpri estoke li nan -80 ℃ oswa nitwojèn likid imedyatman.Pou fè ekstraksyon molekil RNA, eseye sèvi ak echantiyon ki fèk kolekte chak fwa sa posib.
2.Echantiyon yo kolekte yo te konjele ak dekonjle repete.
Sijesyon: Evite repete konjelasyon ak dekonjle (pa plis pase yon fwa) pandan koleksyon echantiyon ak depo, otreman sede asid nikleyik ap diminye.
3.RNase te prezante nan sal operasyon an oswa pa gen okenn gan jetab, mask, elatriye yo te chire.
Sijesyon: Eksperyans molekil RNA yo pi byen fèt nan yon chanm operasyon RNA separe, epi yo netwaye tab eksperimantal la anvan eksperyans lan.Mete gan jetab ak mask pandan eksperyans la pou evite degradasyon RNA ki te koze pa entwodiksyon RNase.
4.Reyaktif la kontamine pa RNase pandan itilizasyon an.
Sijesyon: Ranplase ak nouvo Twous Izolasyon RNA Viral pou eksperyans ki gen rapò.
5.Kontaminasyon RNase tib santrifij yo, pwent pipèt yo, elatriye. Sijesyon: Asire w ke tib santrifijez yo, pwent pipèt yo ak pipèt yo tout san RNase.
Molekil RNA pirifye yo afekte eksperyans en
Molekil RNA yo pirifye pa kolòn pou pirifye a pral afekte eksperyans en si gen twòp iyon sèl oswa pwoteyin, tankou: transcription ranvèse, Northern Blot, elatriye.
1.Genyen iyon sèl ki rete nan molekil RNA eliye yo.
Rekòmandasyon: Asire w ke yo te ajoute volim ki kòrèk la nan etanòl anidrid nan tanpon viRW2, epi lave kolòn pou pirifye a de fwa dapre vitès santrifujasyon kòrèk la sou enstriksyon yo opere; Si gen toujou iyon sèl ki rete, ou ka ajoute tanpon viRW2 nan kolòn pou pirifye a, epi kite li nan tanperati chanm pou 5min.Lè sa a, fè santrifijasyon pou retire kontaminasyon iyon sèl nan pi gwo limit
2.Gen etanòl ki rete nan molekil RNA eluye yo
Sijesyon: yon fwa konfime ke kolòn pou pirifye yo te rense pa Buffer viRW2, fè santrifujasyon vid-tib selon vitès la santrifujeur sou enstriksyon yo opere.Si gen etanòl toujou rete, li ka kite pou 5 minit nan tanperati chanm apre yon santrifujasyon tib vid pou retire etanòl ki rete a nan pi gwo limit.
Manyèl Enstriksyon:
Viral RNA Isolation Kit Manyèl Enstriksyon
