Dirèk RT-qPCR Twous II
Deskripsyon Kit:
◮Dirèk RT-qPCR Twous, lè l sèvi avèk Foreasy Reverse Transcriptase ak Foreasy HS Taq DNA Polymerase devlope pa Foregene, ak tanpon reyaksyon inik, fè twous sa a ak rezistans fò ak konpatibilite, epi li ka dirèkteman teste reyaksyon itilize Foregene Lysis sistèm kòm modèl.Twous sa a ka aplike pou twous deteksyon asid nikleyik COVID-19 ak devlopman twous deteksyon asid nikleyik lòt bakteri patojèn.
Deskripsyon
Direct RT-qPCR Twous bay tanpon RT-qPCR ki pake separeman, gwo efikas Foreasy HS Taq DNA Polymeraseak Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),fè li pratik pou kreye twous back-end ak ajisteman sistèm, nan verifikasyon senp.
Dirèk RT-qPCR Twous, lè l sèvi avèk Foreasy Reverse Transcriptase ak Foreasy HS Taq DNA Polymerase devlope pa Foregene, ak tanpon reyaksyon inik, fè twous sa a ak rezistans fò ak konpatibilite, epi li ka dirèkteman teste reyaksyon itilize Foregene Lysis sistèm kòm modèl.Twous sa a ka aplike pou twous deteksyon asid nikleyik COVID-19 ak devlopman twous deteksyon asid nikleyik lòt bakteri patojèn.
Twous sa a ka dirèkteman eleman nan pwodwi IVD a, lè l sèvi avèk fasil epi vit.Li sèlman bezwen verifikasyon fasil, san yo pa devlope ankò.
Espesifikasyon
500T, 50,000T
Konpozan twous
| Kit sa yo (20 μL sistèm reyaksyon) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50,000 T | |
| fasil Rtranskriptaz envès (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 ml×10 |
| 2 × Dirèk RT-qPCRTanpon | 1 mL × 5 | 500 mL × 1 |
| Enstriksyon | 1 | 1 |
Etap opere
A: Prepare modèl ak reyaktif
1. Prepare modèl RNA prepare (Li rekòmande pou itilize Foregene Total RNA Isolation Kit seri twous pou ekstrè ak pirifye modèl RNA) oswa echantiyon pwodwi fann (Li rekòmande pou itilize sistèm Foregene Lysis), primè espesifik (10 μM) ak lòt consommables ki enpòtan, enstriman.
2. Mete 2 × Direct RT-qPCR tanpon, RNase-Free ddH2O ak 20 × ROX Reference Dye (si li nesesè) nan bwat la ak glas, fè sa yo fonn natirèlman, epi melanje dousman.
B: Prepare sistèm RT-qPCR
Jwenn mwatye volim nan tanpon reyaksyon nan sistèm reyaksyon (pa egzanp, si volim nan sistèm nan se 20 μL, li bezwen jwenn 10 μL 2 × dirèk RT-qPCR tanpon.). Poukantite anzim ki koresponn lan, nou sijere saM-MLV: 10-30 U/20 μL sistèm reyaksyon,TaqADN polymerase：1-2 U/20 μL sistèm reyaksyonsa a se sijesyon nou an, ou ta dwe teste ak ajiste li), ajoute modèl RNA, primè espesifik ak sond, epi ajoute RNase-Free ddH2O a 20 μL.Preparasyon espesifik sistèm reyaksyon RT-qPCR ka refere li nan tablo sa a 1.
Tablo 1: Prepare sistèm RT-qPCR
| Eleman | Volim | Final konsantrasyon |
| 2 × dirèk RT-qPCR tanpon | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 U | |
| Pi devan (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| Sonde (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Modèl (RNA oswa Lysate) | X μL | |
| 20 × ROX Referans Dye | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| Volim Total | 20 μL |
Remak: Forward Primer ak Reverse Primer se premye primè espesifik jèn sib.Sistèm qPCR a ta ka ajiste selon pratik eksperimantal ak modèl PCR.Nou rekòmande 400nM pou konsantrasyon final pifò primè yo.Ajiste volim primè espesifik ak sond selon konsantrasyon prepare ak konsantrasyon final rekòmande a, tanpri.
1 *: Chwazi konsantrasyon final apwopriye ROX Reference Dye dapre diferan enstriman PCR quantitative.Pi bon konsantrasyon ROX Reference Dye nan enstriman PCR quantitative komen yo montre nan tablo ki anba la a:
| Enstriman PCR quantitative | Final konsantrasyon ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One,elatriye. | 1× (pa egzanp, ajoute 1μl 20×ROX Referans Dye nan sistèm reyaksyon 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P ak Mx4000, elatriye. | 0.5× (pa egzanp, ajoute 0.5μl 20×ROX Referans Dye nan sistèm reyaksyon 20 μL) |
| Roche PCR enstriman, Bio-Rad PCR enstriman, Eppendorf quantitative PCR enstriman, elatriye. | San ROX Referans Dye |
Depo ak etajè lavi
Twous la ta dwe estoke nan -20 ± 5 ℃.Li ta dwe imedyatman estoke nan -20 ℃ frijidè thermostatique.Peryòd validite a se 2 zan si yo estoke nan kondisyon apwopriye.
